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 人酸性神经鞘磷脂酶(ASM)ELISA Kit
  • 人酸性神经鞘磷脂酶(ASM)ELISA Kit
  • 人酸性神经鞘磷脂酶(ASM)ELISA Kit

    参考价格: ¥3000.00
    品  牌:USA
    产品型号:RC01415B (人酸性神经鞘磷脂酶(ASM)ELISAKit)
    所在地区:上海
    上架时间:2012年08月01日
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    详细说明

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    试剂的准备
    1. 标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:
    40 IU/ml (6号标准品) 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。
    20 IU/ml (5号标准品) 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
    10 IU/ml (4号标准品) 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
    5.0 IU/ml (3号标准品) 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
    2.5 IU/ml (2号标准品) 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
    1.25 IU/ml (1号标准品) 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
    0 IU/ml (空白对照) 原始浓度不用稀释直接加入50ul。

    2. 洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。

    操作步骤
    1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
    2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
    3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
    4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
    5. 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
    6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
    7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
    8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
    9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。

    SPECIMEN COLLECTION\ PROCESSING AND STORAGE
     Serum---Avoid any inintentional stimulation of the cells by the procedure. Use pyrogen\endotoxin free collecting tubes. Serum should be removed rapidly and carefully from the red cells after clothing. For that, after clothing, centrifuge at approximately 1000×g for 10 min and remove serum.
     Plasma---EDTA\ citrate and heparin plasma can be assayed. Spin samples at 1000×g for 30 min remove particulates. Harvest plasma.
     Cell culture supernatants---Remove particulates and aggregates by spinning at approximately 1000×g for 10 min.
     Storage---If not analyzed shortly after collection, samples should be aliquoted(250-500ul) to avoid freeze-thaw cycles and stored frozen at -70℃. Avoid multiple freeze-thaw cycles of frozen specimens. When possible, avoid use of badly hemolyzed or lipemic sera. If large amounts of particles are present, this should be removed prior to assay by centrifugation or filtration.
     Recommendation---Do not thaw by heating at 37℃ or 56℃. Thaw at room temperature and make sure that sample is completely thawed and homogenous before assaying.

    PREPARATION OF REAGENTS
     Standards: Standard have to be reconstituled with the volume of standard buffer diluent indicated on the vial. This reconstitution produces a stock solution of 40IU/ml AMCA. Allow standard to stand for 5
     minutes with gentle swirling prior to making dilutions. Serial dilutions of standard must be made before each assys and cannot be stored.

    40 IU/ml (6  Standard) Original density 50ul。
    20 IU/ml (5  Standard) 100ul  6 Standard  +100ul diludent
    10 IU/ml (4  Standard) 100ul  5 Standard  +100ul diludent
    5.0 IU/ml (3  Standard) 100ul  4 Standard  +100ul diludent
    2.5IU/ml (2  Standard) 100ul  3 Standard  +100ul diludent
    1.25 IU/ml (1  Standard) 100ul  2 Standard  +100ul diludent
    0 IU/ml Blank Control 50ul。

     Washing buffer 50×concentrate:  Dilute 50 times in distilled water.