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 大鼠热休克因子1(HSF1)ELISA Kit
  • 大鼠热休克因子1(HSF1)ELISA Kit
  • 大鼠热休克因子1(HSF1)ELISA Kit

    参考价格: ¥3000.00
    品  牌:USA
    产品型号:RC01787B (大鼠热休克因子1(HSF1)ELISA Kit)
    所在地区:上海
    上架时间:2012年08月01日
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    样品收集、处理及保存方法
    1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
    2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
    3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
    4、 组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液
    5、 保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

    试剂的准备
    1. 标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:
    800 ng/ml (6号标准品) 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。
    400 ng/ml (5号标准品) 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
    200 ng/ml (4号标准品) 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
    100 ng/ml (3号标准品) 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
    50 ng/ml (2号标准品) 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
    25 ng/ml (1号标准品) 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
    0 ng/ml (空白对照) 原始浓度不用稀释直接加入50ul。

    2. 洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。


    操作步骤
    1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
    2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
    3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
    4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
    5. 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
    6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
    7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
    8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
    9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。