北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司

RIPA裂解液

RIPA裂解液

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品  牌:鼎国
产品型号:WB-0071 (50ml)
所在地区:华北 北京
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详细说明
使用说明 
1.培养细胞
     取出裂解液,待融化后颠倒混匀数次,适量分装冻存。在使用前取出PMSF(100mM),按比例加入(使其最终浓度为1mM)混匀,立即使用。
 贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗2-3遍(如血清中的蛋白没有干扰,也可以不洗)。按6孔板每孔加入100-200微升的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞数秒后细胞就会被裂解。
悬浮细胞:收集培养细胞,离心去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗2-3遍(如血清中的蛋白没有干扰,也可以不洗),用手指把细胞用力弹散,按6孔板每孔细胞加入100-200微升的比例加入裂解液。如果细胞数量较大,应按50-100万细胞/管分装或根据细胞数量按比例增加裂解液。用手指轻弹管底以促进裂解液和细胞充分接触,裂解完全时应无明显的细胞颗粒。
裂解物经10,000-14,000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
 裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。
 2.组织样品 
     取Ep管,分别称重标记,把组织剪切成小块装入Ep管中,称重。按每20毫克组织加100-200微升的比例加入裂解液(如裂解不完全,可以适当增加用量;如需要的蛋白样品浓度较高,可以适当减少用量)。用手握式电动组织细胞匀浆器匀浆约1分钟或直至充分裂解。10,000-14,000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
    如果组织样品本身非常细小,如淋巴细胞,可直接加入裂解液,通过振荡(Vortex)以使样品裂解完全。
保存条件:
     PMSF需-20℃保存,裂解液若经常使用,可于4℃保存至少三个月。若长期保存,建议置于-20℃。
注意事项 :
 1.为获得最佳的实验效果,可适当分装使用,以尽量避免反复冻融。 
 2.PMSF应现用现加。 
 3.裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。 
 4.蛋白酶抑制剂均有较高的毒性,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦直接接触,请立即用流水冲洗,再向医疗保健结构咨询。