上海逸峰生物试剂有限公司

人丙型肝炎IgG(HCV-IgG)Elisa试剂盒

人丙型肝炎IgG(HCV-IgG)Elisa试剂盒

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产品型号:YF2834 (48T/96T)
所在地区:华东 上海
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详细说明

人丙型肝炎IgG(HCV-IgG)Elisa试剂盒

人丙型肝炎IgG(HCV-IgG)Elisa试剂盒

 

 规格:48T/96T

上海逸峰生物试剂有限公司长期提供各种种属、各种系列Elisa试剂盒,价格实惠,质量有保证,信誉第一。欢迎来电索取各ELISA试剂盒产品说明书。凡购买目录本公司ELISA检测试剂盒可免费提供代测服务。

ELISA试剂盒说明

1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。

2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。

3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。

4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。

Elisa试剂盒实验原理

用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗LEP抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗LEP抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的LEP呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

Elisa试剂盒组成及试剂配制

1. 酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。

2. 标准品(Standard):2瓶(冻干品)。

3. 样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。

4. 生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。

5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。

6. 生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)

7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)

8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。

9. 浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10. 终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

 

Elisa试剂盒操作步骤

实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。

1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。

为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。

3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。

4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl,37℃,60分钟。

5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

注:

1. 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。

2. 每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是最后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。

3. 为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。

4. 未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。

5. 建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。

洗板方法

手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

计算

以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项

1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。

2. 洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。

3. 一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。

5. 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数。

6. 在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。

7. 底物请避光保存。

8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。

 

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