上海逸峰生物试剂有限公司

羊白介素-1β(goat IL-1β)ELISA kit

羊白介素-1β(goat IL-1β)ELISA kit

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产品型号:YF1750 (48T/96T)
所在地区:华东 上海
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详细说明

羊白介素-1β(goat IL-1β)ELISA kit

羊白介素-1β(goat IL-1β)ELISA试剂盒

 规格: 48T/96T

 

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说明书以B因子(BF) Elisa试剂盒为例:

B因子(BF)酶联免疫分析(ELISA)

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称:

通用名:人B因子(BF)酶联免疫分析试剂盒

使用目的:

本试剂盒用于测定人血清、血浆、或其它组织液中B因子(BF)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中B因子(BF)水平。用纯化的抗-BF抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人B因子(BF),再与HRP标记的羊抗人抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人B因子(BF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人B因子(BF)浓度。

试剂盒组成

1

25倍浓缩洗涤液

20ml×1瓶

7

终止液

6ml×1瓶

2

酶标试剂

6ml×1瓶

8

标准品(18μg/ml)

0.5ml×1瓶

3

酶标包被板

12孔×8条

9

标准品稀释液

1.5ml×1瓶

4

样品稀释液

20ml×1瓶

10

说明书

1份

5

显色剂A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2张 

6

显色剂B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1个

标本要求

1.标本采集后尽早进行实验。

2.待检血清1:20稀释:具体为190μl样品稀释液中加10μl待检血清,混匀即可)

3.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

4.可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

操作步骤

1.         标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为(12μg/ ml,8μg/ ml ,4μg/ ml,2μg/ ml, 1μg/ ml)。

2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.         配液:将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用

5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.         温育:操作同3。

8.         洗涤:操作同5。

9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.  请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×100)。

5.  严格按说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准

6.底物请避光保存。

7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

检测范围:

0.8μg/ ml -15μg/ ml

规格:

96人份/盒

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6个月

 

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