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羊弓形体(tox)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒

羊弓形体(tox)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒

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详细说明

  羊弓形体(tox)酶联免疫分析(ELISA

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称:

通用名:羊弓形体(tox)酶联免疫分析试剂盒

使用目的:

本试剂盒用于定性测定羊血清,血浆及相关液体样本中弓形体(tox)。

实验原理

本试剂盒采用间接法测定标本中羊弓形体(tox)。用纯化的羊弓形体(tox)抗体包被微孔板,制成固相抗体,与样品中弓形体(tox)温育后,加入生物素标记的抗IgG抗体,再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中羊弓形体(tox)的存在与否。,

试剂盒组成

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1份

1份

 

封板膜

2片(48)

2片(96)

 

密封袋

1个

1个

 

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

阴性对照

0.5ml×1瓶

0.5ml×1瓶

2-8℃保存

阳性对照

0.5ml×1瓶

0.5ml×1瓶

2-8℃保存

生物素标记的抗-IgG抗体

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

链霉亲和素-HRP

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

终止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

浓缩洗涤液

(20ml×20倍)×1瓶

(20ml×30倍)×1瓶

2-8℃保存

 

 

标本要求

1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

操作步骤

1.         编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照(不加样品、生物素标记的抗-IgG抗体、链霉亲和素-HRP)1孔

2.         加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,37℃温育45分钟。

3.         配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

4.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复4次,拍干。

5.         加生物素标记的抗-IgG抗体:每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl(空白孔除外)。37℃温育30分钟

6.         洗涤:操作同4。

7.         加链霉亲和素-HRP:每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP(空白孔除外),轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

8.         洗涤:操作同4。

9.         显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

 

结果判定:

  试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10

  临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15

  阴性判定:样品OD值< 临界值(CUT OFF)者为羊弓形体(tox)阴性

  阳性判定:样品OD值≥ 临界值(CUT OFF)者为羊弓形体(tox)阳性

 

注意事项

1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。

2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

4.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物请避光保存。

6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm

7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全。

 

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6个月