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Semaphorin 6D  ELISA试剂盒

Semaphorin 6D ELISA试剂盒

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详细说明

Semaphorin 6D  ELISA试剂盒

ELISA试剂盒操作步骤和注意事项
试剂盒组成:48孔/96孔
主要用途:科研检测
产品规格:96T/48T
96T指可以做94个标本,2个标准对照
48T指可以做47个标本,1个标准对照
96T-84个样本
48T-42个样本
有效期:6个月 
保存:2-8℃
ELISA试剂盒操作步骤 
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。 
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。 
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。 
3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。 
4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl,37℃,60分钟。 
5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。 
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。 
7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。 
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。 
注: 
1. 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。 
2. 每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是最后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
3. 为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。 
4. 未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液、或辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。 
5. 建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。 
需要而未提供的试剂和器材 
1. 标准规格酶标仪 
2. 高速离心机 
3. 电热恒温培养箱 
4. 干净的试管和Eppendof管 
5. 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器 
6. 蒸馏水,容量瓶等 
洗板方法 
手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。 
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 
计算 
以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 
ELISA试剂盒注意事项 
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。 
2. 洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。 
3. 一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。 
5. 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数。 
6. 在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。 
7. 底物请避光保存。 
8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
产品用途:科研ELISA检测试剂盒.本公司可提供实验代测服务.
检测原理: 采用双抗体夹心ABC-ELISA法 
产品种属齐全有:人,小鼠,大鼠,豚鼠,猪,犬,兔,牛,羊,猴,兔,马等动物种属。
待检样本:体液,血清,血浆,细胞培养上清液,尿液,组织匀浆,心房水标本等等。
保存条件:2-8℃
服务承诺:工作时间内免费的技术咨询和指导,为客户提供来样检测服务,最大限度实验结果的有效性。
服务内容:
凡购买本司目录任何一种检测试剂盒(酶联免疫、放射免疫),您只需将需要检测的动物(Human,Rat,Mouse,Rabbit,Pig,Monkey……)种类和检测指标(介素类、因子类)及标本数量(48T/96T)通知我司业务人员即可。在接到客户标本当日起,一周内将检测报告交到客户手中!详情请您来电咨询。联系电话021-61555803 13681863943