南京赛泓瑞生物科技有限公司

 Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒(膜联蛋白A5-绿色荧光素/碘化丙啶细胞凋亡检测试剂盒)
  • Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒(膜联蛋白A5-绿色荧光素/碘化丙啶细胞凋亡检测试剂盒)
  • Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒(膜联蛋白A5-绿色荧光素/碘化丙啶细胞凋亡检测试剂盒)

    参考价格: ¥0.00
    所在地区:江苏
    上架时间:2012年09月21日
    留言咨询
    与企业取得联系时请告知该信息获取自中国教育装备采购网
    我要分享
    详细说明

    Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒(膜联蛋白A5-绿色荧光素/碘化丙啶细胞凋亡检测试剂盒)
    一、
    试剂盒说明

    在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素(EGFP、FITC)标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。

    碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

    本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测(不推荐用于检测组织样本)。 

    二、 试剂盒组份

    组份

    Cat: KGA105

    (10 assays)

    Cat: KGA106

    (20 assays)

    Cat: KGA107

    (50 assays)

    Cat: KGA108

    (100 assays)

    储存条件

    AnnexinV-FITC

    50μL

    100μL

    250μL

    500μL

    4℃避光

    Propidium Iodide

    50μL

    100μL

    250μL

    500μL

    4℃避光

    Binding Buffer

    5 mL

    10.0 mL

    25 mL

    50 mL

    4℃

     

    三、 试剂盒以外自备仪器和试剂

    流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器

    1.5m L  Microtube、载玻片、盖玻片(荧光显微镜观察需用)、PBS、不含EDTA的胰酶消化液

    四、 使用注意事项

    1.   微量试剂取用前请离心集液。

    2.  Annexin V-FITC,Propidium Iodide (PI)避光保存及使用。

    3.  Propidium Iodide (PI)有毒,操作时要戴手套。

    4.  本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,不推荐用于检测组织样本。

    5.  推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,需用不含EDTA的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中,防止进一步的损伤。

    6.  细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。

    7.   因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。

    五、 操作方法

    1.   悬浮细胞离心(2000rpm离心5min)收集;贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化收集(注:胰酶消化时间不易过长,否则容易引起假阳性);

    2.   用PBS洗涤细胞二次(2000rpm离心5min)收集1~5×105细胞;

    3.   加入500μL的Binding Buffer悬浮细胞;

    4.   加入5μL Annexin V-FITC混匀后,加入5 μL Propidium Iodide,混匀;

    5.   室温、避光、反应5~15min;

    6.   请在1 hour内,进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。

    A.  荧光显微镜观察

    1.   滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞;

    2.   对于贴壁细胞来说,也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡;

    (1)         将细胞于盖玻片上生长,用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡,并设立阴性对照组;

    (2)         用PBS洗涤细胞两次;

    (3)         在500μL 的Binding Buffer中加入5μL Annexin V-FITC, 5 μL Propidium Iodide,混匀;

    (4)         将上述溶液滴加于盖玻片表面,使盖玻片表面均匀覆盖;

    (5)         避光、室温反应5 min。

    3.   将盖玻片倒置于载玻片上,于荧光显微镜下、双色滤光片(FITC和罗丹明)观察

    Annexin V-FITC荧光信号呈绿色,PI荧光信号呈红色。

    B.   流式细胞仪分析

    用流式细胞仪检测,激发波长Ex=488 nm; 发射波长Em=530 nm。

    Annexin V-FITC的绿色荧光通过FITC通道(FL1)检测;PI红色荧光通过PI通道(FL2或FL3)检测,建议使用FL3。

    荧光补偿调节:使用未经凋亡诱导处理的正常细胞,作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。

    六、 实验范例

    用凋亡诱导剂诱导P388细胞凋亡,在37oC,5%CO2培养箱培养4~6h后,参照说明书的操作方法进行检测,经流式细胞仪检测结果见下图。