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 牛血小板因子3(PF-3)ELISA试剂盒(R&D)
  • 牛血小板因子3(PF-3)ELISA试剂盒(R&D)
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    适用范围:全领域
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    上架时间:2015年04月04日
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    详细说明

    牛血小板因子3(PF-3)ELISA试剂盒操作步骤

      1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为9U/L,6U/L,3U/L,1.5U/L,0.75U/L)。
      2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
      3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
      4. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
      5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
      6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
      7. 温育:操作同3。
      8. 洗涤:操作同5。
      9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
      10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
      11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行
      每个试剂盒操作是不同的,请按说明书操作。具体事项请来电咨询!

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