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大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)ELISA试剂盒

大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)ELISA试剂盒

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上架时间:2018-03-22
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详细说明
大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的检测指标呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法:
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞
刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地
分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟
取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于
-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1. 酶标仪(450nm)
2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20 分钟。从冰箱取出的
浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解
后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3. 浓度为0 的S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5 倍,最终结果乘以5 才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成:
名称96孔配置48孔配置备注
微孔酶标板12 孔×8 条12 孔×4 条无
标准品0.3mL*6 管0.3mL*6 管无
样本稀释液6mL 3mL 无
检测抗体-HRP 10mL 5mL 无
20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释
底物A 6mL 3mL 无
底物B 6mL 3mL 无
终止液6mL 3mL 无
封板膜2 张2 张无
说明书1 份1 份无
自封袋1 个1 个无
注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、12.5、25、50、100、200μmol/ L
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20 稀释,即1 份的20×洗涤缓冲液加19 份的蒸馏水。
洗板方法:
1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min 后甩尽
孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5 次。
2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5 次。
操作步骤:
1. 从室温平衡20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封
袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不
加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶
(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴
锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去
洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5 次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B 各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min 内,在450nm 波长处测定各孔的
OD 值。
结果判断
绘制标准曲线:在Excel 工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应
OD 值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样
本浓度值。
规格:48T/96T
试剂盒性能
1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R 值,大于等于
0.9900。
2. 灵敏度:最低检测浓度小于1.0μmol/L。
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6 个月


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