DH10BAC感受态细胞_中国教育装备采购网

上海超研生物科技有限公司

 DH10BAC感受态细胞
  • DH10BAC感受态细胞
  • DH10BAC感受态细胞

    参考价格: ¥420.00
    品  牌:国产
    产品型号:CC2801 (20*100ul)
    所在地区:上海
    上架时间:2013年04月26日
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    详细说明

    DH10BAC感受态细胞
    1、储存条件:-70 ℃ 保存,避免反复冻融
    2、产品介绍:大肠杆菌DH10 Bac感受态细胞是经特殊工艺制备的,适用于昆虫杆状病毒Bac-to-Bac系统中同源重组的菌株,用于产生重组Bacmid。使用pUC19 质粒检测,转化效率可达107CFU/ug,-70°C 保存几个月转化效率不发生改变。DH10Bac菌株的基因型为:F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ (ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG /pMON14272 / pMON7124
    3、 产品特点:DH10Bac 细胞包含亲本Bacmid bMON14272 和辅助质粒 pMON7124. 亲本Bacmid 包含一个mini-F 复制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位点和lac Zα-互补因子。辅助质粒包含tns ABCD 区域,该区域提供了mini-Tn7从供体质粒插入亲本Bacmid 靶位点所需要的转座蛋白。供体如pFastBac 系列质粒(pFastBac1,pFastBacDual等)含有Tn7R 和Tn7L 同源重组臂,Tn7R 和Tn7L 之间包含庆大霉素抗性基因、昆虫病毒多角体基因启动子、多克隆位点和SV40 病毒的PolyA 加尾信号。当含有靶基因pFastBac 的重组质粒转化到DH10Bac 细胞后,发生重组后就可产生重组Bacmid,提取纯化重组Bacmid 转染昆虫细胞Sf9 或Sf21 就可以包装产生昆虫病毒。此外,DH10Bac 细胞中的The φ80dlacZDM15 基因的产物可以实现β-半乳糖苷酶的α-互补现象,用于重组bacmid 的蓝白斑筛选。
    4、 操作步骤(以下操作均按无菌条件的标准进行):提示
     感受态细胞应保存在-70℃ ,不可多次冻融和放置时间过长,以避免降低感受态细胞的转化效率。
    制备含下面抗生素的LB 固体平板:50 μg/ml kanamycin、7 μg/ml gentamicin、10 μg/ml tetracycline、100 μg/ml X-gal、40 μg/ml IPTG。
    (1) 取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中,置于冰浴中。
    一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA 体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl 感受态细胞为例。
    (2) 向感受态细胞悬液中加入1-10ng 重组质粒,轻轻旋转离心管以混匀内容物,在冰浴中静置30 分钟。
    (3)将离心管置于 42 ℃ 水浴中放置 90 秒,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却 2 分钟,该过程不要摇动离心管。
    (4) 向每个离心管中加入900μl无菌的SOC(不含抗生素),混匀后置于37 ℃ 200rpm,摇床振荡培养4 小时。
    (5)用SOC 培养基进行10 倍梯度稀释,如分成3 个稀释梯度10-1, 10-2, 10-3
    (6) 取100ul 的各个梯度的培养物用于涂布。等平板中的液体完全吸收后,倒置平板,37℃培养24-48 小时。
    (7)保留剩余的菌液于4℃冰箱中,视平板上菌落生长情况决定去留。
    相关试剂及培养基的制备方法
    (1)SOB 和SOC 培养基:称取20g Tryptone ,5g Yeast Extract ,0.5g NaCl 置于1L 烧杯中加入约800ml 的去离子水,完全溶解后再补加10ml 250 mM KCl 溶液,滴加5M NaOH(约0.2ml)调pH 值7.0。 加入去
    离子水将培养基定容至1L。121 灭菌20min。使用时加入5ml 灭菌的2M MgCl2 溶液(此种培养基称为
    SOB)。再补加经0.22um 过滤除菌的1M 葡萄糖溶液2ml(此种培养基为SOC)。
    (2) 转化复苏细菌用的液体SOC 培养基:可以一次高压50ml 液体培养基,无菌状态按1ml 每管分装于高压灭菌的1.5ml 离心管中,装于自封袋中,冻存于-20℃中,每次用一支。可以极大地避免培养基污染和减少
    劳动量。
    (3) LB 固体选择培养基:100ml LB 液体培养基中加入1.5 g 琼脂粉,摇匀后,121℃高压灭菌20 分钟。冷却至50℃左右时加入相应浓度的抗生素(如AMP 浓度通常为100ug/ml),混匀后倒在细菌用的无菌培养皿中,等琼脂凝固后即可使用。
    (4)IPTG:称量1.9g IPTG(MW=238.31)充分溶解于40 ml 灭菌水,浓度为200mmol/L。用无菌0.22 μm过滤膜过滤除菌。小份分装后,-20℃保存。
    (5)X-gal:用DMF(二甲基甲酰胺)配制成20 mg/ml,小份分装(1 ml/份)后,-20℃避光保存。