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  • 彩虹预染超低分子量蛋白质Marker(1.2-45kD)

    参考价格: ¥350.00
    品  牌:国产
    产品型号:RTD6110 (10T(50μl))
    所在地区:上海
    上架时间:2013年04月27日
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    详细说明

    产品编号及规格:

    RTD6110   10T(50μl)   350元

    储存条件:

       -20℃保存,开封后有效期12个月

    产品简介:

        彩虹预染超低分子量蛋白质Marker可以直接观察蛋白电泳及清晰判断Western Blotting的转膜效果。本产品包含3种多肽和3种低分子量蛋白质组成,分子量范围为1.2kD-45kD,分子量大小为  1.2kD,4.6kD,6.5kD,16kD,27kD,45kD (注:蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非预染蛋白Marker标定过。参见注意事项7)。

    使用说明:

    1. 超低分子量多肽的蛋白电泳较常规的蛋白电泳更为复杂,请仔细参阅说明书后再进行操作

    2. 第一次收到产品后,室温彻底融化混匀,离心快甩将溶液收集到管底,根据需要适量分装,-20℃贮存,每次使用时取一管使用。

    3. 本产品为即用型产品,使用前取一管Marker样品室温彻底融化后可以直接上样,不要加热。一般说来,0.75mm×5mm(厚度×宽度)的加样孔上样5 μl,其他规格梳子请适当调整上样量。

    4. 制胶:先配制分离胶,聚合后再配制浓缩胶。电泳时,80v跑30-60分钟左右,待指示前沿到达分离胶上沿时,把电压调至130-150v,至所有条带分离清楚后即可停止电泳。整个电泳过程大约需要3-4个小时。

    5. 如果关心较小的多肽(小于5KD),电泳之后可将胶置于固定液(配方6)中固定30分钟,再进行染色,能得到较好的蛋白条带;如果不固定直接染色,小蛋白会不清楚。如果使用配方7进行染色时效果不好或考虑其毒性,请选择本公司的考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液(目录号:RTD6201,该产品具有染色快,无毒,灵敏性高等特点,在小肽的染色中有更大的优势,是常规染色液的理想替代品。

    6 染色:如果使用配方7进行染色时效果不好或考虑其毒性,请选择本公司的考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液(目录号:RTD6201,该产品具有染色快,无毒,灵敏性高等特点,是常规染色液的理想替代品。

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    (背面续:凝胶配方)

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    <!--[endif]--><!--[if !mso & !vml]--> <!--[endif]--><!--[if !vml]-->
    <!--[endif]-->7 预染蛋白Marker由于嵌合了染料,在不同的凝胶系统中迁移率会有不同,因此只能用来粗略估计目的蛋白的大小。如要精确确定蛋白的大小,请在同一凝胶系统中用非预染蛋白Marker来标定预染蛋白Marker的分子量。



    附:小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制

    1. 40%PAA29:1)(配制浓缩胶)     

       丙稀酰胺        38.67 g

       甲叉双丙稀酰胺  1.33 g

     用ddH2O溶解后定容至100 ml,过滤后使用。

    贮存:4℃

    2.  40% PAA19:1 (配制分离胶)

    丙稀酰胺       38 g

    甲叉双丙稀酰胺  2 g

    用ddH2O溶解后定容至100 ml,过滤后使用。

    贮存:4℃

    3. 凝胶缓冲液(配制凝胶用)

    [3M Tris; 0.3% SDS; pH8.45]

    Tris碱  182g

    ddH2O   300ml

    1.5 g SDS或15ml 10% SDS

    用HCl调pH值至8.45

    用ddH2O定容至500ml

    贮存:4℃

    4. 10×阳极缓冲液(下槽缓冲液)

    [1M Tris pH8.9]

    Tris碱    121.1g

    ddH2O   400ml

    用HCl调pH值至8.9

    用ddH2O定容至500ml

    贮存:室温

    注:使用前稀释成1×阳极缓冲液使用。

    5. 10×阴极缓冲液(上槽缓冲液)

    [1M Tris; 1M Tricine ;1% SDS; pH 8.25]

    Tris碱 121.14 g

    Tricine  179.2 g

    SDS 10g

    用ddH2O溶解,

    用HCl调节pH至8.25,定容至1000ml。

    贮存:室温

    注:使用前稀释成1×阴极缓冲液使用

    6. 固定液

    5% 戊二醛溶液

    注:此溶液现用现配。

    7. 染色液

    冰醋酸            100ml

    考马斯亮蓝G-250   0.25g

    水                900ml

    8. 脱色液

    冰醋酸  100ml

    水      900ml

     

    9.  2×Tricine蛋白样品上样缓冲液(10ml

    1ml  1M Tris-Cl pH6.8

    2.4ml 甘油

    0.8g  SDS

    0.31g DTT(或者400μl β-巯基乙醇)

    2mg 考马斯亮蓝G-250

    用灭菌ddH2O定容至10ml

    混匀分装-20℃贮存备用

    超低分子量蛋白Marker凝胶的配制方法:

    (一块0.75mm mini胶用量)

     

    分离胶

    浓缩胶

     

    18%T, 5%C /6.0 ml

    5%T, 3.3%C/4 ml

    40% PAA(19:1)

    2.7 ml

    /

    40% PAA (29:1)

    /

    0.5 ml

    凝胶缓冲液

    1.5 ml

    1 ml

    乙二醇

    1.8 ml

    /

    ddH2O

    /

    2.5 ml

    10%APS

    45 μl

    30 μl

    TEMED

    9 μl

    6 μl