超低分子量蛋白质Marker II(1.4-26.6kD)_中国教育装备采购网

上海超研生物科技有限公司

 超低分子量蛋白质Marker II(1.4-26.6kD)
  • 超低分子量蛋白质Marker II(1.4-26.6kD)
  • 超低分子量蛋白质Marker II(1.4-26.6kD)

    参考价格: ¥200.00
    品  牌:国产
    产品型号:RTD6107 (10T(100μl))
    所在地区:上海
    上架时间:2013年04月27日
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    详细说明

    储存条件:

       -20℃保存,开封后有效期12个月。

    产品简介:

        本产品包含2种多肽和4种低分子量蛋白质组成,可以用来判断 SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。分子量范围为1.4kD-26.6kD,分子量大小为1.4kD,3.5kD,6.5kD,14.2kD,16.9kD,26.6kD。

    使用说明:

    1. 超低分子量多肽的蛋白电泳较常规的蛋白电泳更为复杂,请仔细参阅说明书后再进行操作

    2. 收到产品后,室温彻底融化混匀后,离心快甩将溶液收集到管底,根据需要适量分装,-20℃贮存,每次使用时取一管使用。

    3. 本产品已经含有了样品缓冲液,使用前取一管Marker样品室温彻底融化后,95℃预热5分钟即可上样电泳,用考马斯亮蓝G-250染色后可见6条蛋白带。一般说来,0.75mm×5mm(厚度×宽度)的加样孔上样10μl,其他规格梳子请适当调整上样量。

    注:一次热处理后,未用尽样品-20℃保存;下次使用时只要室温完全融化混匀后即可上样,可以不用再加热处理。

    4. 制胶:先配制分离胶,聚合后再配制浓缩胶。电泳时,80-100v跑30-60分钟左右,待指示前沿到达分离胶上沿时,把电压调至150-200v,至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要3-4个小时。注:如果电泳时间过短,染色时,指示前沿容易遮挡1.4kD和3.5kD条带。

    5. 如果关心较小的多肽(小于5KD),电泳之后可将胶置于固定液中固定30分钟,再进行染色,能得到较好的蛋白条带;如果不固定直接染色,小蛋白会不清楚。如果使用配方7进行染色时效果不好或考虑其毒性,请选择本公司的考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液(目录号:RTD6201,该产品具有染色快,无毒,灵敏性高等特点,在小肽的染色中有更大的优势,是常规染色液的理想替代品。

    6. 当用配方7进行染色时,由于超低分子量多肽极易从凝胶中浸出,因此染色时间不要太长,染色一般要1个小时左右(最多不要超过1.5小时)。

    附:小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制

    1. 40%PAA29:1)(配制浓缩胶)     

       丙稀酰胺        38.67 g

       甲叉双丙稀酰胺  1.33 g

     用ddH2O溶解后定容至100 ml,过滤后使用。

    贮存:4℃

    2.  40% PAA19:1 (配制分离胶)

    丙稀酰胺       38 g

    甲叉双丙稀酰胺  2 g

    用ddH2O溶解后定容至100 ml,过滤后使用。

    贮存:4℃

    3. 凝胶缓冲液(配制凝胶用)

    [3M Tris; 0.3% SDS; pH8.45]

    Tris碱  182g

    ddH2O   300ml

    1.5 g SDS或15ml 10% SDS

    用HCl调pH值至8.45

    用ddH2O定容至500ml

    贮存:4℃

    4. 10×阳极缓冲液(下槽缓冲液)

    [1M Tris pH8.9]

    Tris碱    121.1g

    ddH2O   400ml

    用HCl调pH值至8.9

    用ddH2O定容至500ml

    贮存:4℃

    注:使用前稀释成1×阳极缓冲液使用。

    5. 10×阴极缓冲液(上槽缓冲液)

    [1M Tris; 1M Tricine ;1% SDS; pH 8.25]

    Tris碱 121.14 g

    Tricine  179.2 g

    SDS 10g

    用ddH2O溶解,

    用HCl调节pH至8.25,定容至1000ml。

    贮存:4℃

    注:使用前稀释成1×阴极缓冲液使用

    6. 固定液

    5% 戊二醛溶液

    注:此溶液现用现配。

    7. 染色液

    冰醋酸            100ml

    考马斯亮蓝G-250   0.25g

    水                900ml

    8. 脱色液

    冰醋酸  100ml

    水      900ml

     

    9.  2×Tricine蛋白样品上样缓冲液(10ml

    1ml  1M Tris-Cl pH6.8

    2.4ml 甘油

    0.8g  SDS

    0.31g DTT(或者400μl β-巯基乙醇)

    2mg 考马斯亮蓝G-250

    用灭菌ddH2O定容至10ml

    混匀分装-20℃贮存备用

     

    超低分子量蛋白Marker凝胶的配制方法:

    (一块0.75mm mini胶用量)

     

    分离胶

    浓缩胶

     

    18%T, 5%C /6.0 ml

    5%T, 3.3%C/4 ml

    40% PAA(19:1)

    2.7 ml

    /

    40% PAA (29:1)

    /

    0.5 ml

    凝胶缓冲液

    1.5 ml

    1 ml

    乙二醇(电泳级)

    1.8 ml

    /

    ddH2O

    /

    2.5 ml

    10%APS

    45 μl

    30 μl

    TEMED

    9 μl

    6 μl