上海超研生物科技有限公司

超低分子量蛋白质Marker II(1.4-26.6kD)

超低分子量蛋白质Marker II(1.4-26.6kD)

参考价格:¥200.00
品  牌:国产
产品型号:RTD6107 (10T(100μl))
所在地区:华东 上海
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详细说明

储存条件:

   -20℃保存,开封后有效期12个月。

产品简介:

    本产品包含2种多肽和4种低分子量蛋白质组成,可以用来判断 SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。分子量范围为1.4kD-26.6kD,分子量大小为1.4kD,3.5kD,6.5kD,14.2kD,16.9kD,26.6kD。

使用说明:

1. 超低分子量多肽的蛋白电泳较常规的蛋白电泳更为复杂,请仔细参阅说明书后再进行操作

2. 收到产品后,室温彻底融化混匀后,离心快甩将溶液收集到管底,根据需要适量分装,-20℃贮存,每次使用时取一管使用。

3. 本产品已经含有了样品缓冲液,使用前取一管Marker样品室温彻底融化后,95℃预热5分钟即可上样电泳,用考马斯亮蓝G-250染色后可见6条蛋白带。一般说来,0.75mm×5mm(厚度×宽度)的加样孔上样10μl,其他规格梳子请适当调整上样量。

注:一次热处理后,未用尽样品-20℃保存;下次使用时只要室温完全融化混匀后即可上样,可以不用再加热处理。

4. 制胶:先配制分离胶,聚合后再配制浓缩胶。电泳时,80-100v跑30-60分钟左右,待指示前沿到达分离胶上沿时,把电压调至150-200v,至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要3-4个小时。注:如果电泳时间过短,染色时,指示前沿容易遮挡1.4kD和3.5kD条带。

5. 如果关心较小的多肽(小于5KD),电泳之后可将胶置于固定液中固定30分钟,再进行染色,能得到较好的蛋白条带;如果不固定直接染色,小蛋白会不清楚。如果使用配方7进行染色时效果不好或考虑其毒性,请选择本公司的考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液(目录号:RTD6201,该产品具有染色快,无毒,灵敏性高等特点,在小肽的染色中有更大的优势,是常规染色液的理想替代品。

6. 当用配方7进行染色时,由于超低分子量多肽极易从凝胶中浸出,因此染色时间不要太长,染色一般要1个小时左右(最多不要超过1.5小时)。

附:小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制

1. 40%PAA29:1)(配制浓缩胶)     

   丙稀酰胺        38.67 g

   甲叉双丙稀酰胺  1.33 g

 用ddH2O溶解后定容至100 ml,过滤后使用。

贮存:4℃

2.  40% PAA19:1 (配制分离胶)

丙稀酰胺       38 g

甲叉双丙稀酰胺  2 g

用ddH2O溶解后定容至100 ml,过滤后使用。

贮存:4℃

3. 凝胶缓冲液(配制凝胶用)

[3M Tris; 0.3% SDS; pH8.45]

Tris碱  182g

ddH2O   300ml

1.5 g SDS或15ml 10% SDS

用HCl调pH值至8.45

用ddH2O定容至500ml

贮存:4℃

4. 10×阳极缓冲液(下槽缓冲液)

[1M Tris pH8.9]

Tris碱    121.1g

ddH2O   400ml

用HCl调pH值至8.9

用ddH2O定容至500ml

贮存:4℃

注:使用前稀释成1×阳极缓冲液使用。

5. 10×阴极缓冲液(上槽缓冲液)

[1M Tris; 1M Tricine ;1% SDS; pH 8.25]

Tris碱 121.14 g

Tricine  179.2 g

SDS 10g

用ddH2O溶解,

用HCl调节pH至8.25,定容至1000ml。

贮存:4℃

注:使用前稀释成1×阴极缓冲液使用

6. 固定液

5% 戊二醛溶液

注:此溶液现用现配。

7. 染色液

冰醋酸            100ml

考马斯亮蓝G-250   0.25g

水                900ml

8. 脱色液

冰醋酸  100ml

水      900ml

 

9.  2×Tricine蛋白样品上样缓冲液(10ml

1ml  1M Tris-Cl pH6.8

2.4ml 甘油

0.8g  SDS

0.31g DTT(或者400μl β-巯基乙醇)

2mg 考马斯亮蓝G-250

用灭菌ddH2O定容至10ml

混匀分装-20℃贮存备用

 

超低分子量蛋白Marker凝胶的配制方法:

(一块0.75mm mini胶用量)

 

分离胶

浓缩胶

 

18%T, 5%C /6.0 ml

5%T, 3.3%C/4 ml

40% PAA(19:1)

2.7 ml

/

40% PAA (29:1)

/

0.5 ml

凝胶缓冲液

1.5 ml

1 ml

乙二醇(电泳级)

1.8 ml

/

ddH2O

/

2.5 ml

10%APS

45 μl

30 μl

TEMED

9 μl

6 μl