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EHA105农杆菌感受态细胞

EHA105农杆菌感受态细胞

参考价格:¥420.00
品  牌:国产
产品型号:CC3101 (20*100ul)
所在地区:华东 上海
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详细说明
产品介绍:
采用化学试剂制备的EHA105农杆菌感受态细胞,适用于水稻和烟草等植物的转基因操作。具有利福平抗性,经植物双元pCAMBIA2300M质粒检测,转化效率可达103CFU/ug,-80°C保存几个月转化效率不会发生改变。

转化前准备:
1.冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3.将抗性平板在28℃培养箱中平衡至少15分钟。

转化方法(采用冻融方法):
1.取-80℃保存的EHA105农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化。
2.无菌条件下,向刚刚化冻的感受态细胞悬液中加入1ug需要转化的质粒DNA细胞中,轻轻混匀,冰水浴中静置10分钟。
3.将离心管至于液氮中速冻5分钟。(注:也可以用干冰和无水乙醇混合物代替液氮)
4.然后快速将离心管置于37℃水浴中保持 5分钟,不要晃动水面。
5.将离心管放回冰水浴中,再保持 5分钟。
6.无菌条件下加入800ul无抗生素的2×YT或LB液体培养基。于28℃振荡培养2-3小时,目的是使菌体复苏并表达抗生素抗性。
7.5000rpm离心 1分钟收菌,留100ul左右上清,轻轻吹打重悬菌体,加到相应抗生素的LB固体培养基平板上,用无菌的细菌涂布器或玻璃珠将细胞均匀涂开。等平板中的液体完全吸收后,倒置平板,28℃培养48-72小时。