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  • LBA4404农杆菌感受态细胞

    参考价格: ¥420.00
    品  牌:国产
    产品型号:CC2901 (20*100ul)
    所在地区:上海
    上架时间:2014年06月17日
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    详细说明
    产品介绍:
    采用化学试剂制备的LBA4404农杆菌感受态细胞,适用于玉米和烟草等植物的转基因操作。具有链霉素和利福平抗性,经植物双元pCAMBIA2300M质粒检测,转化效率可达103CFU/ug,-80°C保存几个月转化效率不会发生改变。

    转化前准备:
    1.冰水浴和37℃水浴。
    2.液氮或干冰/乙醇混合物。
    3.将抗性平板在28℃培养箱中平衡至少15分钟。

    转化方法(采用冻融方法):
    1.取-80℃保存的LBA4404农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化。
    2.无菌条件下,向刚刚化冻的感受态细胞悬液中加入1ug需要转化的质粒DNA细胞中,轻轻混匀,冰水浴中静置10分钟。
    3.将离心管至于液氮中速冻5分钟。(注:也可以用干冰和无水乙醇混合物代替液氮)
    4.然后快速将离心管置于37℃水浴中保持 5分钟,不要晃动水面。
    5.将离心管放回冰水浴中,再保持 5分钟。
    6.无菌条件下加入800ul无抗生素的2×YT或LB液体培养基。于28℃振荡培养2-3小时,目的是使菌体复苏并表达抗生素抗性。
    7.5000rpm离心 1分钟收菌,留100ul左右上清,轻轻吹打重悬菌体,加到相应抗生素的LB固体培养基平板上,用无菌的细菌涂布器或玻璃珠将细胞均匀涂开。等平板中的液体完全吸收后,倒置平板,28℃培养48-72小时。