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豚鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA试剂盒

豚鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA试剂盒

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品  牌:ELISA试剂盒
产品型号:48T/96T
所在地区:华东 上海
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详细说明

豚鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA试剂盒W. 用ELISA 法夹心法测人血清中IL-1,IL-6,CRP,TNF, ,请问:
1.预实验时,标准品的浓度怎样确定?梯度做几个,需要做空白孔吗?复孔要做吗?
2.样本的梯度作几个?稀释倍数确定的依据时什么?
3.我测的样本中TNF 量很低,国外有人用高敏试剂盒,国内有用化学发光法,您知
道有没有更经济的方法?
标准品最好做复孔,特别在试验初期,如果 显色剂很稳定的话,空白孔可做可不作。在自己试验时标准品浓度可以不用太多,三个(高中低)即可。你样本中TNF 的量低到什么程度,一般好的ELISA可以测到ng 级别,再小的话就不行了。化学发光法以及比较经济了,你还可以试试生物素亲和素放大的酶免法,可以提高很多灵敏度的。
    W. 双抗夹心法中,最后TMB 用硫酸终止,测量OD450 的时候是用单波长450nm 还是
双波长测量?如果是后者,参考波长是哪个?630nm 可以吗?
豚鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA试剂盒检测程序:
1.标本室温温育30 分钟,洗涤3 次。
2.加酶标抗体室温温育30 分钟,洗涤5 次。
3.加显色液,室温温育30 分钟,终止读数。
血清稀释液配方:PBST+1%BSA
酶标抗体稀释液配方为购买
用CB 包被,不加NaCl,在板制备过程中洗涤只用1 次即可。
血清稀释浓度调整没有意义,必定是同升同降,你应该试试将包被浓度和酶标抗
体浓度做方阵滴定看看,不一定10ug/ml 是最佳包被浓度.怎么选择包被浓度,酶的浓度以及封闭的
条件如何?
1)在包被过程和封闭以后,洗1 次就可以了
2)你这个结果说明你的酶标抗体和包被的反应板有一些非特异性吸附,建议你
将封闭换成1%的BSA 或者5%的脱脂奶粉,在酶标抗体的稀释液中将小牛血清
的浓度增加到20%。
3)间接法的话,血清需要稀释,你的阴性、阳性血清稀释了吗,如果没有的话,
建议1:10 到1:100,不同的稀释度你试试。如果你本来没有,要稀释后再做
的话,根据你目前的结果,估计你要提高包被浓度或者酶标抗体浓度。
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