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  • 转化因子激活蛋白-2

    参考价格: ¥0.00
    所在地区:上海
    上架时间:2013年05月02日
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      注意事项:
    western blot中转移在膜上的蛋白处于变性状态,空间结构改变,因此那些识别空间表位的抗体不能用于western blot检测。这种情况可以将表达目的蛋白的细胞或细胞裂解液中的所有蛋白先生物素化,再用酶标记亲和素进行western blot。实验中取胶和膜需带手套。
    转化因子激活蛋白-2实验步骤:
    1. 组织块称重
    2. 利用液氮、研钵粉碎组织块
    3. 加入RIPA缓冲液(每克组织3 ml RIPA),PMSF(每克组织30μl,10 mg/ml PMSF),利用Polytron进一步匀浆(15,000转/分*1分钟)维持4℃
    4. 加入PMSF(每克组织30μl,10 mg/ml PMSF),冰上孵育30分钟5. 移入离
    心管4℃ 约20,000 g(约15,000转)15分钟
    6. 上清液为细胞裂解液可分装-20℃保存
    7. 进行Bradford比色法测定蛋白质浓度
    8. 取相同质量的细胞裂解液(体积*蛋白质浓度),并加等体积的2×电泳加样缓冲液
    9. 沸水浴中3分钟
    10. 上样
    11. 电泳(浓缩胶20mA,分离胶35mA)
    12. 电转膜仪转膜(100mA 40分钟)
    13. 膜用丽春红染色,胶用考马斯亮蓝染色
    14. Westernblot 试剂盒显色
    15. 分析比较记录