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 小鼠INS试剂盒(胰岛素)ELISA试剂盒<很多好评的试剂盒>
  • 小鼠INS试剂盒(胰岛素)ELISA试剂盒<很多好评的试剂盒>
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    参考价格: ¥0.00
    适用范围:高教
    所在地区:上海
    上架时间:2015年04月11日
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    详细说明
    小鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒
    产品中文: 小鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒
    产品英文: Mouse Insulin,INS ELISA Kit
    规格: 48T/96T
    保质期: 6个月
    保存条件: 2到8度
    试剂盒组成:
    1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
    2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品 0.5ml×1 瓶
    3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶
    4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
    5 显色剂 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张
    6 显色剂 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
    小鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒
    样本处理及要求:
    1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
    2. 血浆:应根据试剂盒的要求选择 EDTA 、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,加入 10 %( v/v )抗凝剂
    ( 0.1M 柠檬酸钠或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右
    ( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。如有沉淀形 成,应再次离心。
    3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
    4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
    5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
    6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
    7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
    小鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒
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    操作步骤
    1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为30ng/L,20ng/L ,10ng/L,5ng/L, 2.5ng/L)。
    2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
    3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
    4. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
    5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
    6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
    7. 温育:操作同3。
    8. 洗涤:操作同5。
    9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 
    10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
    11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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