北京杰辉生物技术有限公司

 兔P选择素(P-Selectin)ELISA Kit
  • 兔P选择素(P-Selectin)ELISA Kit
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    参考价格: ¥2300.00
    品  牌:进口 国产
    产品型号:48T/96T
    所在地区:北京
    上架时间:2013年11月15日
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    详细说明


    兔P选择素(P-Selectin)ELISA Kit

    兔P选择素(P-Selectin/CD62P)试剂盒使用说明书
    本试剂盒仅供研究使用

    特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的兔P-selectin,且与其他相关蛋白无交叉反应。
    有效期:6个月
    预期应用:ELISA法定量测定兔血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中P-selectin含量。
    说明
    1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
    2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
    3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
    4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
    实验原理
    用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗P-selectin抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗P-selectin抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的P-selectin呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
    试剂盒组成及试剂配制
    1. 酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。
    2. 标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
    3. 样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
    4. 生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
    5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
    6. 生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
    7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
    8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
    9. 浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
    10. 终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

    需要而未提供的试剂和器材
    1. 标准规格酶标仪
    2. 高速离心机
    3. 电热恒温培养箱
    4. 干净的试管和Eppendof管
    5. 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器
    6. 蒸馏水,容量瓶等
    标本的采集及保存
    1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
    2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000 g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
    3. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
    注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
    标本的稀释原则:
    首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。最后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。
    标准品的稀释原则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为100 ng/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释100 ng/ml,50 ng/ml,25 ng/ml,12.5 ng/ml,6.25 ng/ml,3.12 ng/ml,1.56 ng/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml,临用前15分钟内配制。
    如配制50 ng/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)100 ng/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。