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人Apelin ELISA试剂盒

人Apelin ELISA试剂盒

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上架时间:2016-05-31
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详细说明

人Apelin ELISA试剂盒
人心血管活性多肽 Apelin酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
药品名称:
通用名:人心血管活性多肽Apelin酶联免疫分析试剂盒
使用目的:
本试剂盒用于测定人血清、血浆、或相关组织液中心血管活性多肽Apelin的含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人心血管活性多肽 Apelin 水平。用纯化的人心血管活性多肽 Apelin 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入 Apelin,再与 HRP 标记的 Apelin 抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Apelin呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人心血管活性多肽Apelin的含量。
试剂盒组成
1 20 倍浓缩洗涤液 30ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品(450ng/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张 
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标本处理及要求
1.血清、血浆标本可直接测定;
2.尿液、脑脊液、腹腔液:2000-3000转/分离心10分钟后,取上清液待测。
3.不能检测含NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
4.采集后尽早进行实验,若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上按序设标准品孔 10 孔,在第一、第二孔中分别加标准品 100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50μl,混匀;再各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl,混匀后,在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉;再各取 50μl分别加到第五、第六孔中;再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取 50μl 分别加到第七、第八孔中;再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中;再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,
混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。( 稀释后各孔加样量都为50μl,浓 度分别为 300ng/L,200ng/L ,100 ng/L,50 ng/L,25 ng/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。  
4. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同 3。
8. 洗涤:操作同 5。
9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后 15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔OD值的),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.严格按说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
6.本试剂不同批号组分不得混用。
7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.底物请避光保存。
检测范围:

20 ng/L -400 ng/L
规格:
96 人份/盒
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月

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公司展台: http://www.yupingbio.com