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人P选择素(P-selectin)ELISA试剂盒

人P选择素(P-selectin)ELISA试剂盒

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上架时间:2016-05-31
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详细说明

人P选择素(P-selectin)ELISA试剂盒

P-选择素(P-selectin)定量检测试剂盒(ELISA

使用说明书

                                                                                                                            

【试剂盒名称】

人P-选择素(P-selectin)定量检测试剂盒(ELISA)

 

【试剂盒用途】

定量检测人血清、血浆及相关液体样本中P-选择素(P-selectin)的含量。

 

【检测原理】

本试剂盒采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本和酶标工作液加入到预先包被人P-选择素(P-selectin)抗体的透明酶标包被板中,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分。依次加入显色剂A、B液,显色剂(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物,在酸的作用下变成黄色,颜色的深浅与样品中人P-选择素(P-selectin)浓度呈正相关,450nm波长下测定OD值,根据标准品和样品的OD值,计算样本中人P-选择素(P-selectin)含量。

 

【试剂盒组成】

1

酶标包被板

12孔×8条

7

显色剂A液

6mL

2

标准品:1600μg/L

0.6mL

8

显色剂B液

6mL

3

20倍浓缩洗涤液

25mL

9

终止液

6mL

4

标准品稀释液

6mL

10

说明书

1份

5

样本稀释液

6mL

11

封板膜

2张

6

酶标试剂

10mL

12

密封袋

1个

备注:标准品用标准品稀释液依次稀释为:1600、800、400、200、100、50μg/L

 

【需要而未提供的试剂和器材】

1、37℃恒温箱

2、标准规格酶标仪

3、精密移液器及一次性吸头

4、蒸馏水

5、一次性试管

6、吸水纸

 

【操作步骤】

1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。

2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);每孔再加入酶标工作液100μL;空白对照孔不加。

4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。

6、显色:每孔先加入显色剂A 液50μL,再加入显色剂B液 50μL,37℃避光显色15min。

7、终止:取出酶标板,每孔加终止液50μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。

8、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。

9、计算:根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

 

【样本要求】

1、样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。

2、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能立即试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心,不得有溶血及颗粒。

 

【注意事项】

1、实验严格按照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

2、酶标包被板开封后如未用完,应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测,取平均值,以减小实验误差。

4、若显色过浅,可适当延长底物温育时间。

5、为避免交叉污染,标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头;酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分,要悬臂加样,不得碰到微孔;不得重复使用封板膜。

6、试剂盒保质期内使用,不同批号的试剂不得混用。

7、底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

 

 

【操作程序总结】

 

准备试剂,样品和标准品

 

 

加入准备好的样品、标准品和酶标工作液,37℃反应60分钟

 

洗板5次,加入显色液A、B,37℃显色15分钟

 

加入终止液

 

15分钟之内读OD值

 

计算

 

【检测范围】

50-1600μg/L

【规格】

96人份/盒

【贮藏】

2-8℃,避光防潮保存。

【有效期】

6个月

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