上海裕平生物科技有限公司
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兔肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒

兔肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒

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产品型号:48T/96T
所在地区:上海
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详细说明

兔肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒
兔肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒

 

兔肿瘤坏死因子αTNF-α)定量检测试剂盒(ELISA

使用说明书

                                                                                                                            

【试剂盒名称】

兔肿瘤坏死因子α(TNF-α)定量检测试剂盒(ELISA)

 

【试剂盒用途】

定量检测兔血清、血浆及相关液体样本中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。

 

【检测原理】

本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被兔肿瘤坏死因子α(TNF-α)抗体透明酶标包被板中,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分,再加入酶标工作液,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物,在酸的作用下变成黄色,颜色的深浅与样品中兔肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度呈正相关,450nm波长下测定OD值,根据标准品和样品的OD值,计算样本中兔肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。

 

【试剂盒组成】

1

酶标包被板

12孔×8条

7

显色剂B液

6mL

2

标准品

0.3mL*6管

8

终止液

6mL

3

20倍浓缩洗涤液

25mL

9

说明书

1份

4

生物素

1mL

10

封板膜

2张

5

酶标试剂

10mL

11

密封袋

1个

6

显色剂A液

6mL

 

 

 

备注:标准品(S0→S5)浓度依次为:320、160、80、40、20、0 ng/L.

 

【需要而未提供的试剂和器材】

1、37℃恒温箱

2、标准规格酶标仪

3、精密移液器及一次性吸头

4、蒸馏水

5、一次性试管

6、吸水纸

 

【操作步骤】

1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。

2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3、设置加样孔:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置。

4、加标准品:标准品孔中加入标准品50μL;空白对照孔不加。

5、加待测样本:待测样本孔中先加入生物素10μL,再加待测样本50μL;空白对照孔不加。

6、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液100μL;空白对照孔不加。

7、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

8、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。

9、显色:每孔先加入显色剂A 液50μL,再加入显色剂B液 50μL,37℃避光显色15min。

10、终止:取出酶标板,每孔加终止液50μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。

11、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。

12、计算:根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

 

【样本要求】

1、样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。

2、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能立即试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心,不得有溶血及颗粒。

 

【注意事项】

1、实验严格按照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

2、酶标包被板开封后如未用完,应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测,取平均值,以减小实验误差。

4、若显色过浅,可适当延长底物温育时间。

5、为避免交叉污染,标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头;酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分,要悬臂加样,不得碰到微孔;不得重复使用封板膜。

6、试剂盒保质期内使用,不同批号的试剂不得混用。

7、底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

 

【操作程序总结】

 

准备试剂,样品和标准品

 

 

加入准备好的样品、标准品和酶标试剂,37℃反应60分钟

 

洗板4次,加入显色液A、B,37℃显色15分钟

 

加入终止液

 

15分钟之内读OD值

 

计算

 

【检测范围】

10ng/L - 320ng/L

 

【规格】

96T/盒

 

【贮藏】

2-8℃,避光防潮保存。

 

【有效期】

6个月