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人过氧化物酶体增殖因子活化受体(PPARs)ELISA试剂盒

人过氧化物酶体增殖因子活化受体(PPARs)ELISA试剂盒

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品  牌:美国RB(Rapidbio)
所在地区:华东 上海
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人过氧化物酶体增殖因子活化受体(PPARs)ELISA试剂盒

 

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操作步骤

1.  标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔 10 孔,在第一、第二孔中分别加标

准品 100µl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50µl,混匀;然后从第一孔、第二

孔中各取 100µl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50µl,

混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取 50µl弃掉,再各取 50µl分别加到第五、第六孔

中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各

取 50µl 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50µl,混

匀后从第七、第八孔中分别取 50µl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准

品稀释液 50µl,混匀后从第九第十孔中各取 50µl弃掉。(稀释后各孔加样量都为 50µl,

浓度分别为 150 pg/mL,100 pg/mL ,50 pg/mL,25pg/mL,12.5 pg/mL)。

2.  加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样

品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,然后再加待测样品 10µl(样

品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混

匀。

3.  温育:用封板膜封板后置37℃温育 30 分钟。

4.  配液:将 30(48T的 20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的 20倍)倍稀释后备用。 

5.  洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此

重复 5次,拍干。

6.  加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。

7.  温育:操作同 3。

8.  洗涤:操作同 5。

9.  显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

15 分钟.  

10.  终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.  测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。

注意事项:

新鲜标本尽早检测,对收集后当天就进行检测的标本,及时储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,请造模取材后,将标本及时分装后放在-20℃或-80℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差,蛋白极易降解,直接影响实验质量,所以避免反复冻融。

安全性:

1. 避免直接接触终止液和底物。如不小心接触到这些液体,请尽快用水冲洗。

2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3. 不要用嘴接触试剂盒里的任何成份。

4 Elisa试剂盒请远离儿童

自备物品:

1 、 37 ℃ 恒温箱2 、 标准规格酶标仪3 、 精密移液器及一次性吸头4 、 蒸馏水

5 、 一次性试管6 、 吸水纸

 

 

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