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人碱性胎儿蛋白(BFP)ELISA试剂盒

人碱性胎儿蛋白(BFP)ELISA试剂盒

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品  牌:美国RB(Rapidbio)
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人碱性胎儿蛋白(BFP)ELISA试剂盒

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实验原理

用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的,且与其他相关蛋白无交叉反应。

有效期:6个月

预期应用:ELISA法定量测定血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中的含量。

说明

1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。

2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。

3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。

4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。

试剂盒组成及试剂配制

1.         酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。

2.         标准品(Standard):2瓶(冻干品)。

3.         样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。

4.         生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。

5.         辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。

6.         生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)

7.         辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)

8.         底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。

9.         浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10.     终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

在收集样本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行

检测的样本,及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本,及时分装后冻存在-20℃备用,有条件的,最好-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。

液体类标本: 包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

1. 血清:

室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

2. 血浆:

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

3. 尿液:

用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

4. 细胞培养上清:

检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。

5. 培养细胞

检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

6. 组织标本

切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

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