北京冬璞泰和科技有限责任公司

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 RNeasy Plus Mini Kit (50)  74134 (FQIAGEN)
  • RNeasy Plus Mini Kit (50)  74134 (FQIAGEN)
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    参考价格: ¥0.00
    品  牌:QIAGEN
    产品型号:74134
    适用范围:高教
    所在地区:
    上架时间:2018年10月15日
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  • 详细说明
    RNeasy Plus Mini Kit (50)  74134 (FQIAGEN)
    • 独特的gDNA Eliminator柱,无需DNase处理
    • 有效去除基因组DNA
    • 数分钟内得到RNA,产量重复性好
    • RNA在敏感的下游应用中表现出色
    RNeasy Plus Mini Kit将快速方便的RNA纯化与高效去除基因组DNA整合在一起,可纯化至多100 μg RNA。细胞或组织裂解液流过gDNA去除柱,去除基因组DNA。然后使用RNeasy Mini离心柱纯化总RNA。该试剂盒可在QIAcube全自动核酸纯化仪上自动化进行。可使用RNAlater RNA Stabilization Reagent或Allprotect Tissue Reagent方便的稳定组织样本,并使用TissueRuptor或TissueLyser体系高效破碎样本。处理较小样本,可使用RNeasy Plus Micro Kit(离心柱的结合能力为45 μg RNA)。
    性能
    RNeasy Plus Mini操作流程可从细胞和组织中纯化得到重复高产的RNA,并高效去除基因组DNA污染,用于敏感的下游应用。通常从培养细胞中可获得Agilent RIN值接近10的总RNA。
    原理

    细胞和易裂解组织首先在含有异硫氰酸胍的高变性Buffer RLT Plus中裂解和匀质化,该缓冲液能使RNases立即失活,以保证分离到完整的RNA。裂解液再流过gDNA Eliminator柱。该离心柱与高盐缓冲液共同作用,可选择性高效的去除基因组DNA。加入乙醇以提供RNA结合的合适条件,样本再加入到RNeasy Mini离心柱。含有硅胶膜的特制离心柱能特异性的结合裂解细胞中的RNA。

    操作流程

    可从多达107个细胞或30 mg组织中纯化总RNA。简洁的工作流程可在25分钟内纯化得到已去除基因组DNA的RNA。样本首先被裂解和匀质化。裂解液流过gDNA Eliminator柱,在流过gDNA Eliminator柱的溶液中加入乙醇,样本再加上样到RNeasy Mini离心柱。RNA结合到膜上,污染物被洗去。获得高品质RNA,洗脱体积30 μl或更大。

    处理不同的起始样本可用不同的实验方案。实验方案的不同之处主要在于样本的裂解和匀质化。样本上样到gDNA Eliminator柱之后的步骤就类似。此操作流程适合富集mRNA,不包括大部分小于200 nt的RNAs(如rRNAs和tRNAs)。RNeasy Plus操作流程稍作修改后可从培养细胞中纯化含miRNA等小RNAs的总RNA。

    使用Buffer RLT Plus(RNeasy Plus Mini Kit提供)进行组织破碎和匀质化时,可能会产生过多泡沫。在破碎和匀浆前向Buffer RLT Plus中加入Reagent DX(单独提供)可充分减少泡沫产生。Reagent DX经仔细检测,表明配合此试剂盒使用不会影响RNA的纯度或下游应用。

    应用

    RNeasy Plus Mini Kit纯化得到的RNA适合对少量DNA敏感的下游应用,如定量real-time RT-PCR。纯化得到的RNA还可以用于其他应用。