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双甲基精氨酸水解酶2抗体IgG

双甲基精氨酸水解酶2抗体IgG

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详细说明

双甲基精氨酸水解酶2抗体IgG经荧光抗体染色的标本,需要在荧光显微镜下观察。最好在染色当天即作镜检,以防荧光消退,影响结果。
荧光显微镜检查应在通风良好的暗室内进行。首先要选择好光源或滤光片。滤光片的正确选择是获得良好荧光观察效果的重要条件。
双甲基精氨酸水解酶2抗体IgG在光源前面的一组激发滤光片,其作用是提供合适的激发光。激发滤光片有两种。MG为紫外光滤片,只允许波长275~400nm的紫外光通过,最大透光度在365nm;BG为蓝紫外光滤片,只允许波长325~500nm的蓝外光通过,最大透光度为410nm。靠近目镜的一组阻挡滤光片(又称吸收滤光片或抑制滤光片)的作用是滤除激发光,只允许荧光通过。透光范围为410~650nm,代号有OG(橙黄色)和GG(淡绿黄色)两种。观察FITC标记物可选用激发滤光片BG12,配以吸收滤光片OG4或GG9。观察RB200标记物时,可选用BG12与OG5配合。
2.间接法可用于检测抗原和抗体,。本法有两种抗体相继作用,第一抗体为针对抗原的特异抗体,第二抗体(荧光抗体)为针对第一抗体的抗抗体。本法灵敏度高,而且在不同抗原的检测中只需应用一种荧光抗体。
3.补体结合法本法是间接法的第一步抗原抗体反应时加入补体(多用豚鼠补体),再用荧光标记的抗补体抗体进行示踪(图17-3)。本法敏感度高,且只需一种抗体。但易出现非特异性染色,加之补体不稳定,每次需采新鲜豚鼠血清,操作复杂。因此较少应用。
4.标记法本法用FITC及罗丹明分别标记不同的抗体,而对同一标本作荧光染色。在有两种相应抗原存在时,可同时见到橙红和黄绿两种荧光色泽。
检测方法:荧光或着色沉淀,荧光标记物用特殊波长的光激发时发射出可见光,下表列出了
几种荧光素的分子特征:
荧光素颜色 激发波发射波长分子量
Aminomethylcoumarin (AMCA) Blue 353 440 410
Fluorescein (FITC) Green 495 528 390
Fluorescein (DTAF) Green 495 528 530
Rhodamine (TRITC) Red 550 570 444
Texas Redtm Red 596 620 625
Cy2tm Green 489 505 897
Cy3tm Orange 552 565 949
二抗连接标记酶HRP and AP 与其底物产生有颜色的沉淀物
辣根过氧化物酶
Horseradish peroxidase (HRP)
碱性磷酸酶
Alkaline phosphatase (AP)
AEC (red) Fast red (pink)
DAB (brown) INT (yellow / brown)
NBT (brown / purple)
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