赛百慷细胞库,生物实验

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 人肺癌细胞
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  • 人肺癌细胞

    参考价格: ¥1050.00
    品  牌:icell
    产品型号:A549
    适用范围:高教
    所在地区:上海 徐汇区
    上架时间:2018年06月26日
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    详细说明

      

    人肺癌细胞

    细胞介绍

    该细胞系由D.J.Griad通过肺癌组织移植培养建系,患者为58岁白人男性。A549能通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。

    细胞特性

    1)来源:肺癌

    2)形态:上皮细胞样,多角形;贴壁生长

    3)含量:>1x106

    4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

    5)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

    运输和保存

    可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:

    (1)干冰运输,收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;

    (2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

    (3)收到细胞后请拍照,3天内如果发现污染,请及时拍照与我们联系。

    细胞接受后的处理:

    1)收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。

    2)请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

    3)弃去T25瓶中的培养基,添加6ml新的的完全培养基。

    4)如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代。

    5)接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。

    细胞用途:仅供科研使用。

    细胞培养操作规程,供参考

    一.培养基及培养冻存条件准备:

    1)准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。

    2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。

    3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

    二.细胞处理:

    1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

    2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

    对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

    1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

    2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。

    3.轻轻吹打后吸出,移入15ml离心管中,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养液后吹匀。

    4 . 收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中,建议冻存一支备用,后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。

    3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。

    下面T25瓶为类;

    1,细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入1ml含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。

    2,4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度不低于1x10E6/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识。

    3,将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。