黄石研科生物科技有限公司

4008190228-0161
 人CD163分子(CD163) ELISA试剂盒
  • 人CD163分子(CD163) ELISA试剂盒
  • 人CD163分子(CD163) ELISA试剂盒

    参考价格: ¥1250.00
    品  牌:研科生物
    产品型号:YKE10063
    适用范围:高教
    所在地区:湖北 黄石
    上架时间:2018年11月14日
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    详细说明

    人CD163分子(CD163) ELISA试剂盒说明书

    【货 号】YKE10063

    【产品名称】

    通用名称:人CD163分子(CD163) ELISA试剂盒

    英文名称: Human Cluster of differentiation 163(CD163) ELISA kit

    【包装规格】

    96人份/盒

    【预期用途】

    仅供科研使用,定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人CD163分子(CD163) 的浓度。

    【检验原理】

    本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。特异性抗人sCD163单克隆抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体,经过孵育,样本中存在的sCD163与固相抗体和检测抗体结合。洗涤去除未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(streptavidin-HRP)。洗涤后,加入显色底物TMB,避光显色。颜色反应的深浅与样本中sCD163的浓度成正比。加入终止液终止反应,在450 nm波长(参考波长570 -630 nm)测定吸光度值。

    【主要组成成分】

    主要成分

    组分

    规格

    数量

    包被微孔板

    96T

    1板

    标准品

    4000pg/mL

    2管

    抗体

    80uL

    1管

    辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素

    150uL

    1管

    10×检测缓冲液

    5mL

    1瓶

    标准品稀释液

    5mL

    1瓶

    TMB显色液

    10mL

    1瓶

    TMB终止液

    10mL

    1瓶

    洗涤缓冲液(20X)

    30ml

    1瓶

    封板膜

    4张

    注意:使用前请检查试剂盒中试剂的标签和数量与表格是否一致

    【样本要求】

    样本类型和采集

    细胞培养上清

    300 g 离心 10 分钟去除沉淀物,即刻检测, 或者分装,-20℃以下贮存。

    血清样本

    分离管分离血清。在 1000 g 离心之前,使血样凝集 30 分钟。吸取血清样本之后即刻检测,或 者分装,-20℃以下贮存。

    血浆样本

    EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝收集血浆样本。1000 g 离心 3 0 分钟收集样本。即刻检测,或者 分装,-20℃以下贮存。 本试剂盒可能适用于其它生物学样本。

    细胞培养上清、血清和血浆已经过验证。

    注意:检测前,样本中可见的沉淀必须去除。不要使用严重溶血或高血脂的样本。 样本应分装并贮存于-20℃,以避免人CD163活性的丢失。如果在 24 小时内检测,样本可以 存放在 2 - 8℃。 避免样本的反复冻融。在检测前,冷冻样本应该缓慢地恢复至室温,轻柔地混匀。

    样本保存和稳定性

    样本在2-8℃条件下,可以储存72h,或者在- 20℃储存6个月。样本收集后,不是一次检测完,请按一次用量分装冻存,避免反复冻融,使用时在室温下解冻,确保样品均匀充分解冻。

    【检验方法】

    试剂准备

    检测前请将所有的试剂、样本恢复至室温。 如果浓缩的试剂出现结晶,37℃温浴,直至结晶全部溶解。

    1×洗液

    吸取 20×浓缩洗液 30 ml 至 1 L 的量筒,加蒸馏水或去离子水至600 ml,轻轻混匀,避免泡 沫。 转移至干净瓶内。2 - 25℃贮存,1×洗液可稳定 30 天。

    1×检测缓冲液

    吸取 10×浓缩检测缓冲液 5 ml 至 100 ml 量筒,加蒸馏水或去离子水至 50 ml,轻轻混匀,避 免泡沫。 2 - 8℃贮存,1×检测缓冲液可稳定保存 30 天。

    检测抗体 稀释前充分混匀。根据标准品和待测样本的数量,用 1×检测缓冲液按 1:100 稀释浓缩的检 测抗体。 注意:请在 30 分钟内使用稀释后的检测抗体。

    辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素

    稀释前充分混匀。 根据标准品和待测样本的数量,用 1×检测缓冲液按 1:100 稀释浓缩的辣根过氧化物酶标记的 链霉亲和素。 注意:请在 30 分钟内使用稀释后的辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。

    样本稀释

    如果样本需要稀释,请用试剂盒提供的 1×检测缓冲液稀释血清/血浆样本,用细胞培养基稀释 细胞培养上清。

    人CD163分子(CD163) 标准品

    用蒸馏水或去离子水重溶人CD163分子(CD163) 标准品,重溶体积标注在人CD163分子(CD163) 标准品的标签上。轻柔 地涡旋震荡,确保充分混匀,重溶后标准品的浓度为4000 pg/ml。重溶后静置 10 - 30 分钟。稀释 前充分混匀。 请使用聚丙烯管进行标准品稀释。

    标准曲线制作血清/血浆样本标准曲线的制作:

    取 250 μl 浓缩的人CD163分子(CD163) 标准品,加入 250 μl 标准品稀释液,作为标准曲线的最高浓度 (2000 pg/ml)。在每一个试管中加入 250 μl 标准品稀释液。使用高浓度标准品做 1:1 系列稀释。每次移 液时,请确保充分混匀。以标准品稀释液作为标准曲线的零浓度。

    细胞培养上清样本标准曲线的制作:

    取 250 μl 浓缩的人CD163分子(CD163) 标准品,加入 250 μl 细胞培养基,作为标准曲线的最高浓度 (2000 pg/ml)。在每一个试管中加入 250 μl 细胞培养基。使用高浓度标准品做 1:1 系列稀释。每次移液 时,确保充分混匀。以细胞培养基作为标准曲线的零

    【检测步骤】

    检测之前请将所有的试剂、样本平衡至室温。

    1. 准备好所有需要的试剂及工作浓度标准品。

    2.将不需要的板条拆卸下来,放回装有干燥剂的铝箔袋,重新封好封口。

    3.加入300 μl1×洗液静置浸泡30秒。为了获得理想的实验结果浸泡是必须的。弃掉洗液之后,在吸水纸上将微孔板拍干。洗板完成之后,请立即使用微孔板,不要让微孔板干燥。

    4. 复孔加入100 μl2倍倍比稀释的标准品。空白孔复孔加入100 μl标准品稀释液。

    5. 样本孔加入80 μl 1×检测缓冲液和20 μl预稀释的样本。

    6. 每孔加入50 μl稀释的检测抗体。保证步骤4、5、6连续加样,不要间断。加样过程在15分钟内完成。

    7. 使用封板膜封板。300转/分钟振荡,室温孵育2小时。

    8.弃掉液体,每孔加入300 μl洗液洗板,洗涤6次。每次洗板,在吸水纸上拍干。为获得理想的实验性能,必须彻底移除残留液体。

    9.每孔加入100 μl稀释的辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。

    10. 使用新的封板膜封板。300转/分钟振荡,室温孵育45分钟。

    11. 重复步骤8。

    12. 每孔加入100 μl显色底物TMB,避光,室温孵育5 -30分钟。

    13. 每孔加入100 μl终止液。颜色由蓝色变为黄色。如果颜色呈现绿色或者颜色的变化明显不均匀,请轻轻叩击板框,充分混匀。

    14. 在30分钟之内,使用酶标仪进行双波长检测,测定450 nm最大吸收波长和570 nm或630 nm参考波长下的OD值。校准后的OD值为450 nm的测定值减去570 nm或630 nm的测定值。仅使用450 nm测定会导致OD值偏高,并且准确度降低。

    【结果计算】

    计算标准品和样本的平均OD值,然后减去零浓度标准品的OD值。

    以标准品浓度为横坐标,OD值为纵坐标,用计算机软件进行回归拟合生成标准曲线。回归分析确定最佳拟合曲线。通过对浓度值和OD值取对数拟合,可以对标准曲线进行线性化。此过程可能可以得到更多样本的浓度,但数据的准确度会降低一些。

    注意:标准曲线最高浓度点的终浓度为4000 pg/ml。如果完全按照说明书的步骤操作(20 μl样本+ 80μl检测缓冲液),计算样本浓度时请乘以稀释因子5。

    如果样本按照说明书进行了稀释,最终的稀释倍数为500。如果样本进行了其它方式的稀释,计算样本浓度时请乘以相应的稀释倍数。

    【检验方法的局限性】

    1、仅供科研使用,不得用于临床诊断。

    2、在试剂盒标示的有效期内使用,过期产品不得使用。

    3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。

    4、使用试剂盒配套的样品稀释液。

    5、如果样本值高于最高标准品浓度值,请将样本适当稀释后,再重新测定。

    6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果,检测前,请排除该因素。

    7、通过其他方法得到的检测结果,与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。

    【产品性能指标】

    1、物理性能

    试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装,无破损漏气。

    2、剂量反应曲线线性

    校准品剂量反应曲线相关系数r值,大于等于0.9900。

    3、精密度

    批内精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在同一个板块内精度评估。批内变异系数CV%小于10%。

    批间精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在不同板块内精度评估。批间变异系数CV%小于15%。

    4、检测范围

    1.56-100ng/ml

    5、灵敏度

    最低检出剂量小于5pg/mL

    6、回收率

    三组已知的高、中、低浓度样品,进行五次回收率评估,回收率在85%-115%之间。

    7、特异性

    本试剂盒识别天然和重组人CD163分子(CD163) ,与结构类似物无交叉。

    8、稳定性

    2℃-8℃保存,有效期6个月。

    【注意事项】

    生物安全

    1、检测必须符合实验室管理规范的规定,严格防止交叉污染,所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。

    2、试剂盒的液体组分中,含有proclin-300防腐剂,可能引起皮肤过敏反应,避免吸入烟雾与皮肤接触。

    3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入烟雾。戴上防护手套,实验完成后彻底洗手。

    技术提示

    1、混合蛋白溶液时,避免起泡。

    2、加校准品与样本时,每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头,公共组分应该悬臂加样,避免交叉污染。

    3、合适的温育时间,和充分的洗涤步骤,是保证实验结果准确性的必要条件。

    4、底物溶液为无色液体,保存过程中变为蓝色,代表底物溶液已经失效,不得使用。

    5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致,加入终止液后,蓝色底物产物,会瞬间变为黄色。

    6、实验中,用剩的板条,应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

    7、所有液体组分,使用前充分摇匀,严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。

    废物处理

    所有使用或未使用的试剂,所有污染性的一次性材料,应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序,每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别,进行废物和污物的处理,同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。