黄石研科生物科技有限公司

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 人CD147分子(CD147)定量检测试剂盒
  • 人CD147分子(CD147)定量检测试剂盒
  • 人CD147分子(CD147)定量检测试剂盒

    参考价格: ¥1250.00
    品  牌:Yankobio
    产品型号:YKE10102
    适用范围:高教
    所在地区:湖北 黄石
    上架时间:2018年11月14日
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    详细说明

    人CD147分子(CD147)定量检测试剂盒 (ELISA)说明书

    【货号】YKE10102

    【产品名称】

    通用名称:人CD147分子(CD147)定量检测试剂盒(ELISA)

    英文名称:Human Cluster of differentiation 147(CD147)ELISA KIT

    【包装规格】

    96人份/盒

    【预期用途】

    仅供科研使用,定量检测血清、血浆、组织匀浆中人CD147分子(CD147)的浓度。

    【检验原理】

    本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预包被抗人CD147分子(CD147)抗体(固相抗体)的微孔酶标板中,加入人CD147分子(CD147)校准品和待测样本,再加入另一株HRP标记的抗人CD147分子(CD147)抗体(酶标抗体),经过温育与充分洗涤,去除未结合的组分,在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B,底物在HRP催化下,产生蓝色产物,在终止液(2M 硫酸)作用下,最终转化为黄色,在酶标仪上测定吸光度(OD值),吸光度(OD值)与待测样品中人CD147分子(CD147)的浓度正相关。拟合校准品曲线,可以计算出样本中人CD147分子(CD147) 的浓度。

    【主要组成成分】

    主要成分

    组分

    数量

    主要成分

    校准品

    0.5ml/管*6管

    抗原配制的6个浓度标准品

    包被微孔板

    96T

    预包被固相抗体

    HRP标记抗体

    6mL

    HRP标记的检测抗体

    样本稀释液

    6mL

    PBS

    底物液A

    6mL

    过氧化脲工作液

    底物液B

    6mL

    TMB工作液

    终止液

    6mL

    2mol/L稀硫酸

    20×浓缩洗涤液

    30mL

    含0.15%Tween20的PBS

    说明书

    1份

    --

    自封袋

    1个

    --

    不干胶

    2片

    --

    校准品浓度依次为:2000、1000、500、250、125、62.5 pg/mL。校准品已经通过测试,结果表明HBs抗原阴性,HIV1、HIV2和HCV抗体阴性,由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质,本品必须按照具有潜在的感染性进行处理,处理过程应当遵循通用的安全措施。

    需要但未提供的材料及耗材

    1、酶标仪

    2、精密移液器及一次性吸头

    3、蒸馏水

    4、洗瓶或者自动洗板机

    5、37℃水浴锅或恒温箱

    6、500ml量筒

    7、无粉一次性乳胶手套

    【储存条件及有效期】

    1、2-8℃保存,切勿冷冻,有效期6个月。

    2、开封使用后,包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中,密闭自封袋,并将全部试剂放回2-8℃冰箱。

    3、开封后,按照建议的条件保存,校准品、包被微孔板和HRP标记抗体,有效期为14天,其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。

    【适用仪器】

    半自动的酶标仪,如Thermo MK3,或者国产酶标仪。

    【样本要求】

    样本类型和采集

    以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中,不得使用叠氮钠做为防腐剂。

    1、细胞培养上清:4000rpm条件下离心20min,去除细胞颗粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反复冻融。

    2、血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,4000rpm条件下离心20min,小心地分离出血清,保存在- 20℃以下,避免反复冻融。

    3、血浆:肝素,EDTA,或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下,离心20分钟取上清,血浆保存在-20℃以下,避免反复冻融。

    样本保存和稳定性

    样本在2-8℃条件下,可以储存72h,或者在- 20℃储存6个月。样本收集后,不是一次检测完,请按一次用量分装冻存,避免反复冻融,使用时在室温下解冻,确保样品均匀充分解冻。

    【检验方法】

    试剂准备

    1、使用前,所有的组分都要至少复温60min,确保充分复温到室温。

    2、浓缩洗涤液:从冰箱取出的浓缩洗涤液,会有结晶产生,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水,按1:20稀释,即1份的浓缩洗涤液,添加19份的蒸馏水。

    3、底物:底物液A和B,在使用前,按1:1体积充分混合,混合后15分钟内使用。

    操作程序

    1、所有试剂和组分都先恢复到室温,标准品、质控品和样品,建议做复孔。

    2、按前面试剂准备中描述的方法,配制好试剂盒各种组分的工作液。

    3、从铝箔袋中取出所需板条,剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。

    4、设置标准品孔、样本孔和空白孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL,样本孔加待测样本50μL,空白孔不加。

    5、除空白孔外,标准品孔和样本孔,加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100μL。

    6、用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

    7、揭开封板膜,弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置20s,甩去洗涤液,吸水纸上拍干。

    8、如此重复4次(共洗板5次)。若使用自动洗板机,请按洗板机操作程序进行洗板,添加浸泡20s的程序,可以提高检测的精度。洗板结束,加底物前,要在干净不掉屑的纸上,充分拍干反应板。

    9、将底物A和B按1:1体积充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱温育15min。

    10、所有孔加入终止液50μL,在酶标仪上读取各孔吸光度(OD值)。

    【检验结果的解释】

    检测完成后,以标准品浓度做为纵坐标,对应的吸光度(OD值)作为横坐标,利用计算机软件,采用四参数Logistic曲线拟合(4-pl),创建标准曲线方程,通过样本的吸光度(OD值),利用方程计算样品的浓度值。

    如果样品被稀释,通过上述方法测的的浓度值,要乘以稀释倍数,才是样品的最终浓度

    【检验方法的局限性】

    1、仅供科研使用,不得用于临床诊断。

    2、在试剂盒标示的有效期内使用,过期产品不得使用。

    3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。

    4、使用试剂盒配套的样品稀释液。

    5、如果样本值高于最高标准品浓度值,请将样本适当稀释后,再重新测定。

    6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果,检测前,请排除该因素。

    7、通过其他方法得到的检测结果,与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。

    【产品性能指标】

    1、物理性能

    试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装,无破损漏气。

    2、剂量反应曲线线性

    校准品剂量反应曲线相关系数r值,大于等于0.9900。

    3、精密度

    批内精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在同一个板块内精度评估。批内变异系数CV%小于10%。

    批间精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在不同板块内精度评估。批间变异系数CV%小于15%。

    4、灵敏度

    最低检出剂量小于11. 5pg/mL。

    5、回收率

    三组已知的高、中、低浓度样品,进行五次回收率评估,回收率在85%-115%之间。

    6、特异性

    本试剂盒识别天然和重组人CD147分子(CD147),与结构类似物无交叉。

    7、稳定性

    2℃-8℃保存,有效期6个月。

    8、检测范围

    31.25pg/mL –2000pg/mL

    【注意事项】

    生物安全

    1、检测必须符合实验室管理规范的规定,严格防止交叉污染,所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。

    2、试剂盒的液体组分中,含有proclin-300防腐剂,可能引起皮肤过敏反应,避免吸入烟雾与皮肤接触。

    3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入烟雾。戴上防护手套,实验完成后彻底洗手。

    技术提示

    1、混合蛋白溶液时,避免起泡。

    2、加校准品与样本时,每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头,公共组分应该悬臂加样,避免交叉污染。

    3、合适的温育时间,和充分的洗涤步骤,是保证实验结果准确性的必要条件。

    4、底物溶液为无色液体,保存过程中变为蓝色,代表底物溶液已经失效,不得使用。

    5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致,加入终止液后,蓝色底物产物,会瞬间变为黄色。

    6、实验中,用剩的板条,应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

    7、所有液体组分,使用前充分摇匀,严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。

    废物处理

    所有使用或未使用的试剂,所有污染性的一次性材料,应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序,每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别,进行废物和污物的处理,同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。