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  • 大鼠(Rat)酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)

    中国教育装备采购网 2010/11/10 13:56:19 围观99次 我要分享

    本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断 分离。
    2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心 30 分钟取上清。
    大鼠(Rat)酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)
    3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
    ELISAELISAELISAELISA检测试剂盒检测试剂盒检测试剂盒检测试剂盒
    使用说明书 4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心 10分钟
    检测原理检测原理检测原理检测原理 取上清。
    试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。用纯化的抗体 5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于
    包被微孔板,制成固相载体,往包被抗酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 -20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
    (NADPH)抗体的微孔中依次加入标本或标准品、HRP标记的检测抗 自备物品自备物品自备物品自备物品
    体,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转 1. 酶标仪(450nm)
    化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品 2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
    中的酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)呈正相关。用酶标仪在450nm 3. 37℃恒温箱
    波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。 操作注意事项操作注意事项操作注意事项操作注意事项
    样品收集、处理及保存方法样品收集、处理及保存方法样品收集、处理及保存方法样品收集、处理及保存方法 1. 试剂盒保存在 2-8℃,使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的
    1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞 浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解
    刺激,收集血液后,3000转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地 后再使用。

    2. 标准品临使用时再稀释,稀释后用剩的标准品应立刻丢弃,不可 比稀释,得到 6 个浓度点(包括标准品点):16、8、4、2、1、0.5
    保存。 μmol/L。
    3. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。 2. 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20 稀释。
    4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 洗板方法洗板方法洗板方法洗板方法
    5.5.5.5. 所有液体组分使用前充分摇匀。 1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽
    试剂盒组成试剂盒组成试剂盒组成试剂盒组成 孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板4-5 次。
    名称名称名称名称 96969696孔配置孔配置孔配置孔配置 48484848孔配置孔配置孔配置孔配置 备注备注备注备注 2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板 4-5 次。
    微孔酶标板 12孔×8 条 12孔×4条 无
    操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤
    标准品(16μmol/L) 0.5mL 0.5mL 按说明书进行稀释
    样本稀释液 6mL 3mL 无
    1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条密封放
    标准品稀释液 6mL 3mL
    检测抗体-HRP 6mL 3mL 无
    回4℃。
    20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释
    底物 A 6mL 3mL 无
    2. 除空白孔外,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;待测样本
    底物 B 6mL 3mL 无
    终止液 6mL 3mL 无
    孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5
    封板膜 2张 2 张 无
    说明书 1份 1 份 无
    倍);随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标
    自封袋 1个 1 个 无
    记的检测抗体 50μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温
    试剂的准备试剂的准备试剂的准备试剂的准备
    育50min。
    1. 标准品:标准品(16μmol/L)在实验前用标准品稀释液进行倍3. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去 3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
    洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板 5 次(也可用洗板机按说明 4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
    书操作洗板)。 5. 检测范围:0-16μmol/L
    4. 每孔加入底物A、B各50μL,轻轻振荡混匀,37℃避光孵育15min。 6. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
    5. 每孔加入终止液50μL,15min内,在 450nm 波长处测定各孔的 7. 有效期:6 个月
    OD 值。 免责声明免责声明免责声明免责声明
    结果判断结果判断结果判断结果判断 1. 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所
    1. 每个标准品和样本的OD 值应减去空白孔的OD 值。 产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。
    2. 绘制标准曲线:在 Excel 工作表中,以标准品浓度作横坐标,对 2. 严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者
    应 OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各 承担。
    样本浓度值,再乘以稀释倍数,即为样本浓度。
    试剂盒性能试剂盒性能试剂盒性能试剂盒性能
    1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值,大于等于
    0.9900。
    2. 灵敏度:最低检测浓度小于6号标准品。

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