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  • 大鼠尿素(Urea)酶联免疫分析(ELISA)

    中国教育装备采购网 2011/12/9 11:57:31 围观51次 我要分享

    大鼠尿素(Urea)酶联免疫分析(ELISA

    试剂盒使用说明书

    本试剂盒仅供研究使用。

    药品名称:

    通用名:大鼠尿素(Urea)酶联免疫分析试剂盒

    使用目的:

    本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆及相关液体样本中尿素(Urea)含量。

    实验原理

    本试剂盒应用间接法测定标本中大鼠尿素(Urea)水平。用纯化的大鼠尿素(Urea)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的尿素(Urea)标准品和未知浓度的尿素(Urea)待检样品,温育后,加入生物素标记的抗IgG抗体,再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的尿素(Urea)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠尿素(Urea)浓度。

    试剂盒组成

    1

    20倍浓缩洗涤液

    50ml×1瓶

     

     

    9

    标准品S1(360μmol/L)

    0.5ml×1瓶

    2

    链霉亲和素-HRP

    6ml×1瓶

    标准品S2(240μmol/L)

    0.5ml×1瓶

    3

    酶标包被板

    12孔×8条

    标准品S3(120μmol/L)

    0.5ml×1瓶

    4

    生物素标记的抗-IgG抗体

    6ml×1瓶

    标准品S4(60μmol/L)

    0.5ml×1瓶

    5

    显色剂A液

    6ml×1瓶

    标准品S5(30μmol/L)

    0.5ml×1瓶 

    6

    显色剂B液

    6ml×1/瓶

    10

    密封袋

    1个

    7

    终止液

    6ml×1瓶

    11

    封板膜

    3张

    8

    样品稀释液

    6ml×1瓶

    12

    说明书

    1份

     

    标本要求

    1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

    2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

    操作步骤

    1.       根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

    2.       加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl,在样本反应孔中先加入待测样品10μl再加入样品稀释液40μl(样品最终稀释度为5倍),盖上封板膜,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。

    3.       配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

    4.       洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复4次,拍干。

    5.       加生物素标记的抗-IgG抗体:每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl。37℃温育30分钟

    6.       洗涤:操作同4。

    7.       加链霉亲和素-HRP:每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

    8.       洗涤:操作同4。

    9.       显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

    10.   终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

    11.   测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

     

    计算

      以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值待入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

    注意事项

    1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

    2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

    3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

    4.  如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先将样本稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数(×5×n)。

    5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    6.本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。

    7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

    8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

    9. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

    线形范围:

    20μmol/L -400 μmol/L

    规格:

    96人份/盒

    保存条件及有效期

    1.试剂盒保存:;2-8℃。

    2.有效期:6个月

     

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