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  • 微波ELISA试剂盒诊断日本血吸虫病实验条件的实验

    中国教育装备采购网 2013/10/11 13:00:00 围观164次 我要分享

      快速诊断日本血吸虫病的方法中,微波ELISA法与快速ELISA法相比较,有类同的敏感性和特异性,而且具有更为快速,全过程仅需5min即可显色观察结果,大大提升了检测血吸虫病的工作效率 [1,2] 。本文运用中国预防医学科学院寄生虫病研究所提供的两个批号的快速[3] ,在微波条件下进行试剂稳定性的进一步观察,实验结果报道如下。

      ELISA试剂盒快速诊断日本血吸虫病的方法中,微波ELISA法与快速ELISA法相比较,有类同的敏感性和特异性,而且具有更为快速,全过程仅需5min即可显色观察结果,大大提升了检测血吸虫病的工作效率 [1,2] 。本文运用中国预防医学科学院寄生虫病研究所提供的两个批号的快速[3] ,在微波条件下进行试剂稳定性的进一步观察,实验结果报道如下。

      1 材料与方法

      1.1 试剂盒

      使用由中国预防医学科学院寄生虫病研究所提供的批号为200101和200305的快速ELISA试剂盒。

      1.2 血清

      2000年收集的湖北省急性血吸虫病患者血清15份(以下简称急血),慢性血吸虫病患者血清40份(以下简称慢血),共55份。

      1.3 ELISA试剂盒仪器

      格兰仕WP700L17,系顺德格兰仕电器有限公司产品。

      1.4 方法

      ELISA试剂盒实验时,将1∶50稀释的被检血清100μl滴入快速ELISA试剂盒抗原板小孔,将家用微波炉接通电源,按袁红等 [2] 采用解冻功率340W,辐射60s。取出后,倾去反应液,用自来水连续冲洗3次,拍干,滴入羊抗人IgG100μl,同上辐射时间和功率。取出后,同上倾去反应液,用自来水连续冲洗5次,拍干,加显色剂2滴,观察反应。每张抗原板设阳性及阴性标准血清对照。

      1.5 统计学处理 卡方检验、轶和检验。

      2 结果

      2.1 微波ELISA与快速ELISA的比较 采用批号为200101的快速ELISA试剂盒,用批号为200305的快速ELISA试剂盒作为对照组,酶结合物以1∶1000、1∶500为两个实验稀释度,分别以各自批号的显色剂进行显色,对实验结果进行比较。

      结果表明,当酶结合物为1∶500和1∶1000时,200101试剂盒的特异性和敏感性与200305试剂盒差异无显著性。

      2.2 采用批号为200305的快速ELISA试剂盒中的阳性参考和阴性参考在1∶1000酶结合物条件下的显色为对照组,对显色程度进行进一步观察比较。颜色与对照组阳性参考相同的记为(+),颜色深于对照组阳性参考的视颜色深浅分别记为(++)、(+++)、(++++),颜色与对照组阴性参考相同或浅于阴性参考的记为(-)。

      结果表明,当以同一阳性参考和阴性参考为对照时,200101试剂盒与200305试剂盒阳性反应强度差异有高度显著性。

      3 讨论

      上述结果表明,200101与200305的两个批号的试剂盒对实验结果差异显著性,按中国预防医学科学院寄生虫病研究所提供的ELISA试剂盒说明书,在未开封的情况下置于4℃冰箱保存,有效期为1年,但当改变试剂保存条件,把抗原反应板、酶结合物、阳性参考和阴性参考存放于-25℃冰箱,结果说明低温(-25℃)至2年仍有良好效果,显色剂存放于4℃冰箱仍能有效显色,对于试剂盒的保存有一定的意义,可适合于血吸虫患者少的地区的使用。同样以200305批号,酶结合物1∶500的阳性参考和阴性参考作为参照。200305试剂盒比200101批号的试剂盒显色明显偏深,两个批号试剂盒反应强度差异有非常显著性。当酶结合物的浓度1∶500时,比1∶1000的显色也较深。通过实验得出结论,对于保存期大于1年的快速ELISA试剂盒,建议酶结合物浓度以1∶500为宜。

     

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