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  • 兔脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)ELISA试剂盒使用说明书

    中国教育装备采购网 2015/8/25 16:55:08 围观245次 我要分享

    兔脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。药品名称:通用名:兔脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)酶联免疫分析试剂盒使用目的:本试剂盒用于测定兔血清,血浆及相关液体样本中脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)含量。实验原理本试剂盒应用间接法测定标本中兔脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)水平。用纯化的兔脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)标准品和未知浓度的Lp-PLA2待检样品,温育后,加入生物素标记的抗IgG抗体,再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中兔脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)浓度。 试剂盒组成 1 20倍浓缩洗涤液 50ml×1瓶 9 标准品S1(180μg/L) 0.5ml×1瓶2 链霉亲和素-HRP 6ml×1瓶 标准品S2(120μg/L) 0.5ml×1瓶3 酶标包被板 12孔×8条 标准品S3(60μg/L ) 0.5ml×1瓶4 生物素标记的抗-IgG抗体 6ml×1瓶 标准品S4(30μg/L ) 0.5ml×1瓶5 显色剂A液 6ml×1瓶 标准品S5(15μg/L) 0.5ml×1瓶 6 显色剂B液 6ml×1/瓶 10 密封袋 1个7 终止液 6ml×1瓶 11 封板膜 3张8 样品稀释液 6ml×1瓶 12 说明书 1份标本要求 1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融操作步骤1. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl,在样本反应孔中先加入待测样品10μl再加入样品稀释液40μl(样品最终稀释度为5倍),盖上封板膜,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。3. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复4次,拍干。5. 加生物素标记的抗-IgG抗体:每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl。37℃温育30分钟6. 洗涤:操作同4。7. 加链霉亲和素-HRP:每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。8. 洗涤:操作同4。9. 显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。计算 以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值待入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4. 如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先将样本稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数(×5×n)。5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。线形范围:10μg/L -200μg/L 规格:96人份/盒保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6个月
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