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兰花花叶病毒(CMV)ELISA定性检测原理

中国教育装备采购网 2015/12/30 17:02:23 围观429次 我要分享

兰花花叶病毒(CMV)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。96T使用目的: 本试剂盒用于测定植物组织,细胞及相关样本中兰花花叶病毒(CMV)水平。实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兰花花叶病毒(CMV)表达。用纯化的兰花花叶病毒(CMV)抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中兰花花叶病毒(CMV)相结合,经洗涤除 去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的兰花花叶病毒(CMV)抗体结合,形成抗体-抗 原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝 色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值), 与 CUTOFF 值相比较,从而判定标本中兰花花叶病毒(CMV)的存在与否。试剂盒组成标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不 触及孔壁,轻轻晃动混匀,3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5 次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。7. 温育:操作同 3。8. 洗涤:操作同 5。9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。计算和结果判定:试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15阴性判定:样品 OD 值< 临界值(CUT OFF)者为兰花花叶病毒(CMV)阴性 阳性判定:样品 OD 值≥ 临界值(CUT OFF)者为兰花花叶病毒(CMV)阳性。注意事项1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。5.底物请避光保存。6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为 630nm7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸,使用时必须 注意安全。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6 个月
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