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    参考价格: ¥0.00
    适用范围:高教
    所在地区:上海
    上架时间:2015年03月15日
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    详细说明
    大鼠血管内皮细胞生长因子受体2elisa试剂盒,VEGFR-2试剂盒免费咨询无忧订购
    上海信帆生物科技有限公司专业供应各类ELISA试剂盒,涵盖国产和进口各类ELISA试剂盒,涵盖的品牌包括R&D,BD,CAYMAN,ABCAM,IBL等。同时,还可按照客户要求定制试剂盒。质量保证,价格优惠,欢迎广大客户前来咨询和购买。
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    产品中文: 大鼠血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)ELISA试剂盒
    产品英文: Rat Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 2,VEGFR-2 ELISA KIT 
    ELISA技术原理:以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来.
    1. 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
    2. 结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。
    3. 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。
    4. 受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记 的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。
    5. 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
    6. 加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量 与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定 性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水 平),并且重复性好。
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    样本处理及要求:
    ELISA 的样本实验准备 在收集样本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当 天就进行 检测的样本,及时储存在 4℃备用。对于隔天再检测的样本,及时分装后冻存在-20℃备用, 有条件的,最好-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。
    1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
    2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
    3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
    4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
    5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
    6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
    7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
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    操作步骤
    1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为30ng/L,20ng/L ,10ng/L,5ng/L, 2.5ng/L)。
    2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
    3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
    4. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
    5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
    6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
    7. 温育:操作同3。
    8. 洗涤:操作同5。
    9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 
    10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
    11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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    注意事项:
    1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
    2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
    3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
    4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
    5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    6. 底物请避光保存。
    7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
    8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
    9. 本试剂不同批号组分不得混用。
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