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 鸭白介素2(IL-2)ELISA试剂盒 实验室耗材--elisa
  • 鸭白介素2(IL-2)ELISA试剂盒 实验室耗材--elisa
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    上架时间:2015年10月22日
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    鸭白介素2(IL-2)ELISA试剂盒 实验室耗材--elisa

    产品英文名称:Duck Interleukin 2,IL-2 ELISA kit

    产品规格:48T/96T(进口/国产、原装/分装)

    鸭白介素2(IL-2)ELISA试剂盒 实验室耗材--elisa  

    产品关键字:酶联免疫吸附试验法,采用双抗体夹心ABC-ELISA法 。

    液体类标本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

    公司产品为:科研实验研究用产品。不用于临床诊断,产品的试剂不能用于注射,口服或者其他临床用途。

    鸭白介素2(IL-2)ELISA试剂盒 实验室耗材--elisa

    公司承接生物实验室实验外包服务,可免费代测。

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    测试剂盒检测原理

    ELISA检测试剂盒应用定性夹心免疫检测技术,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗体,这些抗体就会与HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与第一次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有HEV IgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应,并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgM抗体elisa试剂盒的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。

    操作步骤

    方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法

      1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。

      2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。

      3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。

      4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。

      5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

      6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

    方法二 用于检测未知抗体的间接法

      1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;

      2.次日洗涤3次;

      3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;

      4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;

      5.37℃孵育30-60分钟,洗涤;

      6.’最后一遍用DDW洗涤。

      其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

    编辑本段试剂器材

    试剂

      (1) 包被缓冲液(PH9.60.05M碳酸盐缓冲液):

      NaHCO3 1.59克

      NaHCO3 2.93克

      加蒸馏水至1000ml

      (2) 洗涤缓冲液(PH7.4PBS):0.15M

      KH2PO4 0.2克

      Na2HPO4·12H2O 2.9克

      NaCl 8.0克

      KCl 0.2克

      Tween-20 0.05% 0.5ml

      加蒸馏水至1000ml

      (3) 稀释液:

      牛血清白蛋白(BSA) 0.1克

      加洗涤缓冲液至100ml

      或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5~10%使用。

      (4) 终止液(2M H2SO4):

      蒸馏水178.3ml,逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml。

      (5) 底物缓冲液(PH5.0磷酸枣柠檬酸):

      0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml

      0.1M柠檬酸(19.2克/L) 24.3ml

      加蒸馏水50ml。

      (6) TMB(四甲基联苯胺)使用液:

      TMB(10mg/5ml无水乙醇)0.5ml

      底物缓冲液(PH5.5) 10ml

      0.75%H2O2 32μl

      (7) ABTS使用液:

      ABTS 0.5mg

      底物缓冲液(PH5.5) 1ml

      3%H2O2 2μl

      (8) 抗原、抗体和酶标记抗体。

      (9) 正常人血清和阳性对照血清。

    器材

      (1) 聚苯乙烯塑料板(简称酶标板)40孔或96孔,ELISA检测仪,50μl及100μl加样器,塑料滴头,小毛巾,洗涤瓶。

      (2) 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。

      (3) 4℃冰箱,37℃孵育箱。