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大鼠B-淋巴细胞趋化因子16(CXCL16)ELISA试剂盒
  • 大鼠B-淋巴细胞趋化因子16(CXCL16)ELISA试剂盒
  • 大鼠B-淋巴细胞趋化因子16(CXCL16)ELISA试剂盒

    产品报价: 面议
    品  牌:美国RB(Rapidbio)
    所在地区:上海
    (联系我时,请说明是在教育装备采购网上看到的,谢谢!)
    详细说明

    大鼠B-淋巴细胞趋化因子16(CXCL16)ELISA试剂盒大鼠sCD86(sCD86)ELISA试剂盒

    操作步骤:

    1.         编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)

    2.         加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,

    3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

    4.         配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用

    5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

    6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

    7.         温育:操作同3。

    8.         洗涤:操作同5。

    9.         显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟

    10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

    11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

     

    结果判定:

    试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10

    临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15

    阴性判定:样品OD值< 临界值(CUT OFF)者为免疫缺陷病(FIV)阴性

    阳性判定:样品OD值≥ 临界值(CUT OFF)者为免疫缺陷病(FIV)阳性

    注意事项

    1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。

    2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

    3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

    4.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    5.底物请避光保存。

    6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm

    7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全。

     

    ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大,可概括四个方面: 
    1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。 
    2、研究抗酶抗体的合成。 
    3、显现微量的免疫沉淀反应。 
    4、定量检测体液中抗原或抗体成份。 
    酶联免疫吸附试验法以其灵敏度高(可达 ng 甚至pg 水平),特异性好等优点,在生命科学各领域得到广泛应用,它已迈出医药、临床领域,步入农业、渔业、畜牧业和食品加工业。

    操作步骤
    1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
    2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
    3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
    4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
    5. 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
    6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
    7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
    8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
    9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。

     

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