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 鼠抗人肌动蛋白单克隆抗体(广谱)
  • 鼠抗人肌动蛋白单克隆抗体(广谱)
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    所在地区:上海
    上架时间:2013年05月14日
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    公司厂家直销鼠抗人肌动蛋白单克隆抗体(广谱),权威出售各系列检测试剂盒、各种属类elisa试剂盒、酶联免疫试剂盒种类齐全,欢迎大家选购!
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    用途:科研
    规格:96T/48T(盒装)
    鼠抗人肌动蛋白单克隆抗体(广谱)更多优质产品信息:
    大鼠甲状旁腺激素(PTH) 脑啡肽IgG
    大鼠组胺(HIS) 酪酪肽IgG
    大鼠白介素13(IL-13) 肠道肽转运蛋白1/小肽转运蛋白1IgG
    大鼠白介素15(IL-15) 肠道肽转运蛋白2/小肽转运蛋白2IgG
    大鼠白介素16(IL-16) 蛋白激酶R样内质网激酶IgG
    大鼠白介素17(IL-17) 磷酸化蛋白激酶样内质网激酶IgG
    大鼠白介素1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ) 节律抑制蛋白PER1IgG
    大鼠可溶性E选择素(sE-selectin) 外周蛋白IgG
    大鼠白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ) 辣根过氧化物酶标记热休克蛋白27IgG
    大鼠17羟皮质类固醇(17-OHCS) 磷酸化纤维束蛋白同源物1/肌动蛋白集束蛋白/圆线虫紫癜 IgG
    大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG) 胃蛋白酶原CIgG
    大鼠17-酮类固醇(17-KS) 过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1αIgG
    大鼠白介素2可溶性受体α链(IL-2sRα/CD25) 前列腺素E2IgG
    大鼠白介素2可溶性受体β链(IL-2sRβ) 前列腺素F2aIgG
    大鼠白介素3(IL-3) 颗粒蛋白前体IgG
    大鼠白介素5(IL-5) 脯氨酸水解酶4IgG
    大鼠苗条素受体(LR/Ob-R) 抑制素/肿瘤抑制因子IgG
    大鼠瘦素(LEP) 脯氨酸羟化酶2IgG
    大鼠白血病抑制因子(LIF) 脯氨酸羟化酶IgG
    大鼠L选择素(L-Selectin/CD62L) 抗磷酸化粘着斑激酶IgG
    大鼠单核趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF) 抗磷酸化氨基末端激酶1/2IgG
    大鼠单核趋化蛋白2(MCP-2/CCL8) 抗磷酸化神经生长相关蛋白43IgG
    大鼠单核趋化蛋白3(MCP-3/CCL7) 磷酸化神经生长相关蛋白SCG10IgG
    Western Blot操作方法:
    1.制胶及上样:
    (1)配制12%SDS-PAGE分离胶,混匀后注入边条厚度为2mm的两块洁净玻璃板间,其上加
    一薄层异丙醇,室温下静置至凝固。
    (2)待分离胶完全聚合后,倾去其上的水层,以吸水纸吸净残余液体,插入加样梳,缓缓加入浓缩胶,使其充满加样梳间的空隙,室温下静置。待胶完全聚合。
    (3)将凝胶固定于电泳装置上,上、下槽加入电泳缓冲液。
    (4)小心拔去加样梳,使加样孔竖直,以电泳缓冲液冲洗加样孔数次。
    (5)分别取50µg蛋白量的细胞总蛋白样品及蛋白质分子量Marker,按4:1体积比加入5´样品缓冲液,以1´样品缓冲液?配平上样体积(总体积20µ1)后,于沸水浴中煮3min使蛋白变性。
    (6)将处理好的样品按照预定的顺序加入分离胶的上样孔中。
    2.电泳
    (1)接通凝胶电泳仪的电源,初始电压70V。(约30分钟)
    (2)溴酚蓝染料的前缘进入分离胶上缘后提高电压至160V,继续电泳直至溴酚蓝泳出分离胶的下缘。(约60分钟)
    3.转膜
    (1)从玻璃板中取出凝胶,将其浸泡于转移缓冲液中。
    (2)取与胶同样大小的硝酸纤维素膜,以95%乙醇浸泡5秒钟后浸泡于转移缓冲液5分钟以上待用。
    (3)按顺序在转移夹内放置预先经转移缓冲液浸泡的海绵、三层滤纸、硝酸纤维素膜、凝胶、三层滤纸、海绵,保证每层之间没有气泡。
    (4)将转移夹放入转移槽,膜在正极、胶在负极,接冷却循环水,90V稳压转移2小时。
    4.染色
    (1)将硝酸纤维素浸入丽春红使用液中,振摇染色5-10min。
    (2)蛋白质条带出现后,用去离子水洗去硝酸纤维膜上的丽春红底色。
    (3)按照蛋白质分子量Marker指示的位置剪下目的条带所在的硝酸纤维素膜。
    5.封闭
    把硝酸纤维素膜浸入5%脱脂奶粉,室温摇动2小时。
    6.洗膜与杂交
    (1)以T-TBS洗膜,10分钟´ 3次。
    (2)第一抗体封闭: SPARC单抗以T-TBS 1:200稀释,按0.1ml/cm2加入封有硝酸纤维素膜的杂交袋中,去除所有气泡,4℃振摇过夜。
    (3)以T-TBS洗膜,10分钟´ 3次。
    (4)第二抗体封闭:辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔IgG抗体(1:4000),按0.1 ml/cm2加入封有硝酸纤维素膜的杂交袋中,去除所有气泡,室温下振摇60分钟。
    (5)以T-TBS洗膜,10分钟´ 3次。
    7.化学发光与曝光
    (1)将化学发光试剂盒中的两种试剂各取0.5ml,按1:1的比例混合,在暗室中与硝酸纤维素膜摇动孵育1分钟。
    (2)用滤纸沾干膜上的液体,用保鲜膜包好,用感光胶片在压片盒中曝光约1分钟。
    (3)曝光后的感光胶片在显影液中显影约30秒钟,定影液中定影1分钟,用水冲洗后晾干。
    (4)根据曝光情况调整曝光时间,重复压片、显影及定影,选择满意的胶片。
    (5)重复实验三次。
    注意事项:
    western blot中转移在膜上的蛋白处于变性状态,空间结构改变,因此那些识别空间表位的抗体不能用于western blot检测。这种情况可以将表达目的蛋白的细胞或细胞裂解液中的所有蛋白先生物素化,再用酶标记亲和素进行western blot。实验中取胶和膜需带手套。