中国教育装备采购网 【立即登录】 【免费注册】
资讯
专题
人物访谈
政府采购
产品库
求购库
企业库
院校库
案例·技术
会展信息
行业日历
体采通
丙二醛(malondialdehyde,MDA)
  • 丙二醛(malondialdehyde,MDA)
  • 丙二醛(malondialdehyde,MDA)

    产品报价: 12
    产品型号:YX-W-A401
    适用范围:高教
    所在地区:
    (联系我时,请说明是在教育装备采购网上看到的,谢谢!)
    详细说明

    丙二醛(malondialdehydeMDA)含量试剂盒说明书

    微量法

      正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

      测定意义:

      氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸,生成过氧化脂质;后者逐渐分解为一系列复杂的化合物,其中包括MDA。通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平。

      测定原理:

      MDA与硫代巴比妥酸(thiobarbituricacid,TBA)缩合,生成红色产物,在532nm有最大吸收峰,进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量;同时测定600nm下的吸光度,利用532nm与600nm下的吸光度的差值计算MDA 的含量。

      需自备的仪器和用品:

      可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

      试剂的组成和配置:

      提取液:液体100mL×1 瓶,4℃保存;

      试剂一:液体30mL×1 瓶,4℃保存;

      注意事项:

      临用前注意试剂一是否完全溶解,如未溶解,可以70℃加热,并振荡以促进溶解。

      MDA提取:

      1、细菌、细胞或组织样品的制备:

      细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

      组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

      2、血清(浆)样品:直接检测。

      测定步骤:

      1、吸取0.3mL试剂一于1.5mL离心管中,再加入0.1mL样本, 混匀。

      2、95℃水浴中保温30min(盖紧,防止水分散失),置于冰浴中冷却,10000g,25℃,离心10min。

      3、吸取200μL上清液于微量石英比色皿或96孔板中,测定532nm和600nm处的吸光度,记为A532 和A600,ΔA= A532-A600。

      MDA含量计算:

      a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

      1、血清(浆)中MDA 含量的计算:

      MDA 含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样=25.8×ΔA

      2、细菌、细胞或动物组织中MDA 含量计算

      (1)按照蛋白浓度计算

      MDA含量(nmol/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 样)=25.8×ΔA ÷Cpr

      需要另外测定,建议使用本公司BCA 蛋白质含量测定试剂盒。

      (2)按照样品质量计算

      MDA含量(nmol/g 鲜重)=[ ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)

      =25.8×ΔA ÷W

      (3 ) 按照细菌或细胞密度计算:

      MDA含量(nmol/104)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)=0.0516×ΔA

      V 反总:反应体系总体积,4×10-4L;ε:丙二醛摩尔消光系数,155×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万。

      b.96 孔板测定的计算公式如下

      1、血清(浆)中MDA 含量的计算:

      MDA含量(nmol/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样=51.6×ΔA

      2、细菌、细胞或动物组织中MDA 含量计算

      (1)按照蛋白浓度计算

      MDA含量(nmol/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 样)=51.6×ΔA÷Cpr

      需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

      (2)按照样品质量计算

      MDA含量(nmol/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)=51.6×ΔA÷W

      (3 ) 按照细菌或细胞密度计算:

      MDA含量(nmol/104)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)=0.1032×ΔA

      V 反总:反应体系总体积,4×10-4L;ε:丙二醛摩尔消光系数,155×103L/mol/cm;d:96孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。

    访客留言
    姓名
    电话
    单位
    信箱
    留言内容
    提交留言
    同类产品推荐