原理不同:荧光定量PCR实时监测与DNA结合的荧光染料激发的荧光;普通pcr通过检测插入dna中荧光染色剂来看是否有目的片段。
应要求:荧光定量对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp;普通PCR可以扩增长点的片段。荧光定量可以不进行电泳就对产物进行定量分析,普通PCR必须电泳。
结果:荧光定量可以实现精确定量,普通PCR则不行。荧光定量体现可以看到整个扩增过程,可以看到扩增效率,溶解温度,直接得到的标准曲线等,这些是普通PCR无法实现的
RT-PCR有两种:实时荧光定量PCR (Real-Time PCR)和反转录PCR(Reverse Transcription PCR),都属于Q-PCR (Quantitative PCR, 定量PCR),以RNA或cDNA为模板,以cDNA序列设计引物,测量RNA水平的表达。
荧光定量PCR,加荧光,必需在定量PCR上做,一般片段较短(80-120bp),有固定程序,可以根据对照精确计算不同样品间的表达差异。
反转录PCR,不加荧光,一般的PCR仪即可,循环数在15-25之间,片段可选120-500bp,表达差异可以由跑电泳胶显示。
Real-time PCR通常用的方法是SYBR Green,这种方法引物在RT-PCR的基础上需要注意:
1.退火温度同内参;
2.片段长度不要超过200;
real-time PCR的引物可以跑RT-PCR,反之不一定。
上海创赛科技品质提供标准品,细胞因子,培养基,医药中间体,原料药,大包装,生化试剂,实验室耗材,实验室仪器等生化产品,海量产品特价促销中,欢迎来电咨询!
CANSPEC品质提供性能卓越,其优秀的品质满足您不同实验的多种需求,现货,产品详情,科学仪器,实验室耗材,上海创赛,海量产品特价促销中,欢迎来电咨询!