盐析(Salting out)
盐析方法是蛋白质和酶提纯工作中应用最早，至今仍广泛应用的方法。其原理是蛋白质在高浓度的盐溶液中，随着盐浓度的逐渐增加，蛋白质表面的电荷被中和，水化膜被破坏，蛋白质分子相互聚集而从溶液中沉淀析出。盐析法就是根据各种蛋白质在一定浓度的盐溶液中溶解度降低程度的不同而达到彼此分离的方法。
在盐析时，蛋白质的溶解度与溶液中离子强度的关系可用下式表示：
式中S0是蛋白质在纯水(离子强度I=0)中的溶解度，S 为蛋白质在离子强度为I的溶液中的溶解度，KS为盐析常数。
上述公式中当温度和pH 一定时，S0仅取决于蛋白质的性质。因此对于同一蛋白质，在一定温度和pH时，S0是一常数。
设 Log S0 =β
则 Log S=β-KS×I
盐析常数KS主要取决于盐的性质(盐的离子价数和离子平均半径),也和蛋白质的性质有关。不同的蛋白质在同一种盐溶液中的KS值不同，KS值愈大，盐析效果愈好。从上述公式可知在温度和pH一定的同一种盐溶液中，不同蛋白质有各自一定的β和KS值。可以通过改变盐的离子强度来分离不同的蛋白质。这种方法称分段盐析法。对于同一种盐溶液，如果保持离子强度不变，通过改变温度和pH 来改变β值，也可达到盐析分离的目的。这种方法称为“β分段盐析法”。
盐析法提纯蛋白质时应注意以下几个条件的选择。
(一)盐的种类
蛋白质盐析常用中性盐。主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。应用最广泛的是硫酸铵，其优点是：
1.溶解度大 25℃时硫酸铵的溶解度可达4.1mol/L(541g/L)以上。大约每升水可溶解767g之多。在这一高溶解度范围内，许多蛋白质和酶都可以被盐析沉淀出来。上海创赛科技提供7601-54-9，磷酸钠 一元Sodium phosphate monobasic for HPLC, ≥99.0%，商品编号：C13-17844-50g，价格586.62元。
2.温度系数小硫酸铵的溶解度受温度影响不大。例如0℃时，硫酸铵的溶解度仍可达到3.9mol/L(515g/L)。大约每升水可溶解676g。对于需要在低温条件下进行酶的纯化来说，应用硫酸铵是有利的。上海创赛科技提供硫酸铵，Ammonium sulfate，≥99.997% metals basis，7783-20-2，商品编号：C16-A11026-10g，价格125元。
3.硫酸铵不易引起蛋白质变性，对于很多种酶还有保护作用，且价格低廉，容易获得。
硫酸铵的缺点是铵离子干扰双缩脲反应，为蛋白质的定性分析造成一定困难。
(二) 盐的浓度
分段盐析法是通过改变盐的浓度以达到分离目的。应该将盐的浓度准确地分步提高到各种蛋白质所需的浓度。盐的浓度常用饱和度表示，饱和溶液定为100%。调整硫酸铵溶液饱和度的方法有计算、查表两种：
1.添加饱和溶液的计算法
如 S2为所需达到的饱和度，S1为原来的饱和度,V 为达到所需饱和度的溶液体积，Vo为原来的体积。则:
体积的改变造成的误差小于2%，可以忽略不计。
2.查表法(表1-3)
可以从表中直接查到将1 升饱和度为S1的盐溶液浓度提高到饱和度为S2的浓度时所需添加固体硫酸铵的重量(克)。
(三)pH值
如前所述，β值与溶液的pH 值有密切关系。当溶液的pH值达到蛋白质等电点时，β值最小，蛋白质的溶解度最低，最易从溶液中析出。因此在盐析时，应控制溶液的pH值使之接近蛋白质的等电点。
(四)温度
温度对β值的影响不如对pH 值的影响显著。因此，对温度的要求不严格，低温主
要是防止蛋白质变性和降解。
(五)蛋白质浓度
溶液中蛋白质浓度愈高，盐析所需的盐饱和度愈低。所以，盐析的蛋白质浓度不宜过低，但过高的蛋白质浓度也不适合，因其会和其它蛋白产生共沉淀作用而影响纯度。
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