【基本原理】
蛋白质印迹免疫分析的过程包括蛋白质经凝胶电泳分离后，在电场作用下将凝胶上的蛋白质条带转移到硝酸纤维素膜上，经封闭后再用抗待检蛋白质的抗体作为探针与之结合，经洗涤后，再将滤膜与二级试剂—放射性标记的或辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶偶联抗免疫球蛋白抗体结合，进一步洗涤后，通过放射自显影或原位酶反应来确定抗原—抗体—抗抗体复合物在滤膜上的位置和丰度。
【器材】
1.转移电泳仪
2.硝酸纤维素膜
3.滤纸
4.剪刀
5.手套
6.小尺
【试剂】
1.Ig G 标准品。
2.羊抗人辣根过氧化物酶(HRP)标记的IgG 抗体。
3.转移buffer：Tris 3.03g，Gly 14.4g，甲醇200ml，加三蒸水至1000ml 充分溶解，4℃冰箱贮存。
4.Tris buffer(TBS)：Tris 2.42g，NaCl 29.2g，溶于600ml 三蒸水，再用1N HCl调至pH7.5，然后补加三蒸水至1000ml。
5.漂洗液(TTBS)：TBS液500ml，加Tween20 250ul。
6.封闭液：5%脱脂奶粉。
7.抗体buffer：1.5g BSA溶于50ml TTBS。
8.显色液DAB(3.3-diaminobenzidine，3.3-二氨基联苯胺)配制：5mg DAB溶于
10ml 柠檬酸buffer(0.01mol/L 柠檬酸2.6ml，0.02 mol/L Na2HPO4 17.39ml)，加30% H2O2
10μl(临用时现配)。
9.脱色液：甲醇250ml，冰醋酸100ml，加蒸馏水至1000ml。
10.氨基黑染色液(0.1%氨基黑-10B)：0.2g氨基黑-10B 溶于200ml 脱色液中，充分搅拌溶解，滤纸过滤。
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