Agilent1100液相色谱测定甘草中甘草查尔酮A的含量

　　教育装备采购网：药用甘草为豆科植物乌拉尔甘草GlycyrrhizauralensisFisch.，胀果甘草GlycyrrhizainflataBat.或光果甘草GlycyrrhizaglabraL.的干燥根及根茎，是多年生药用草本植物。植化研究表明甘草中存在大量的酚类成分，这些具有生物活性的成分有望成为开发新药的来源[1]。甘草查尔酮A(licochalconeA)是存在于甘草中的一种酚类查尔酮化合物[2]，临床及药理研究表明，甘草查尔酮A具有抗氧化[3]、抗炎[4]、抗菌[5]、抗肿瘤[6]、抗利什曼原虫病[7]、免疫促进和雌激素样[8]等活性，在临床上具有广泛的应用前景，但有关其含量测定的方法还未见报道。本文建立了甘草查尔酮A的HPLC含量测定方法，为进一步开发甘草中这一重要活性成分提供简便可行的检测方法。

　　1仪器与试剂

　　美国Agilent1100液相色谱仪系统;KQ-100DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

　　甘草由新疆昆仑神农有限公司赠送，经新疆甘草种植中心鉴定分别为乌拉尔甘草GlycyrrhizauralensisFisch.，胀果甘草GlycyrrhizainflataBat.和光果甘草GlycyrrhizaglabraL.。甘草查尔酮A对照品，本实验室自制，经质谱、碳谱和氢谱鉴定为甘草查尔酮A(licochalconeA),归一化测定含量为98.81%。乙腈、甲醇为色谱纯;水为重蒸水;其他试剂均为分析纯。

　　2方法与结果

　　2.1溶液制备

　　2.1.1对照品溶液的制备准确称取在60℃干燥至恒重的甘草查尔酮A对照品适量，用流动相配成浓度为0.1mg·ml-1的对照品储备液，待用。

　　2.1.2供试品溶液的制备准确称取干燥恒重甘草粉末(过60目筛)0.5g，置100ml具筛锥形瓶中，加入甲醇25ml，超声处理(功率200W，频率40kHz)30min，过滤，再加入甲醇20ml，超声处理30min，合并滤液，减压浓缩至干，加流动相溶解并定容至50ml，微孔滤膜(0.45μm)过滤，即得供试品溶液。

　　2.2色谱条件

　　色谱柱为大连依利特HypersilODS2C18柱(4.6mm×250mm,5μm);柱温25℃;流动相为甲醇-水-冰醋酸(60∶40∶1);检测波长372nm;流速1.0ml·min-1。

　　2.3方法学考察

　　2.3.1线性关系考察

　　准确吸取甘草查尔酮A对照品储备液2，4，6，8，10ml分别置于5个10ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度。分别吸取上述对照品溶液各10μl，依次注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以浓度C(μg/ml)为横坐标，色谱峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：A=41308C-142057，r=0.9992，线性范围为：0.2～1.0μg。

　　2.3.2精密度实验

　　准确吸取浓度为100μg·ml-1的甘草查尔酮A标准品溶液10μl，重复进样5次，测得峰面积值，计算相对标准偏差RSD为1.51%，说明仪器良好。

　　2.3.3重复性实验

　　准确称取同一批次的胀果甘草5份，按“2.1.2”项下制备样品溶液，依次测定，根据标准曲线换算甘草查尔酮A的含量，计算甘草查尔酮A含量的RSD为2.54%，表明实验方法重复性较好。

　　2.3.4稳定性实验

　　取同一份待测供试品溶液，在0,2,4,8,12h进样测定，测得甘草查尔酮A峰面积值并计算样品峰面积的RSD为1.72%，表明供试品溶液于12h内稳定。

　　2.3.5加样回收率实验

　　准确称取已知含量的样品约0.1g(共5份)，精密加入0.10mg/ml的甘草查尔酮A标准品1ml，按“2.1.2”项下方法制备所需溶液，测定并计算含量。表1结果表明甘草查尔酮A平均回收率为98.76%，RSD为1.94%。表1样品加样回收率实验结果(略)

　　2.4样品测定

　　按照本方法的测定条件，分别测定《中国药典》收录的3种甘草样品，计算甘草查尔酮A的含量，结果见表2。甘草查尔酮A标准品及样品HPLC图谱见图1～2。表2甘草查尔酮A含量测定结果(略)

　　3讨论

　　3.1色谱条件选择