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五味子中多糖的测定方法

教育装备采购网 2016-08-03 09:56 围观589次

  五味子,习称北五味子,为木兰科植物五味子Schisandra chinensis ( Turcz. ) Baill. 的果实,具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心之功效。研究发现,北五味子含木脂素、有机酸、挥发油、多糖等成分。其中,五味子多糖具有保肝、抗疲劳、免疫促进、抗氧化及抗衰老和抗肿瘤等药理作用,具有较好的临床疗效。由于多糖质量是保证五味子临床疗效的重要前提,因此就对五味子中多糖的质量评价,尤其是其质量分数测定的准确性有了更高的要求。

  目前检测五味子中多糖的方法主要有高效液相色谱法和比色法,前者因高纯度的五味子多糖对照品难以获得等因素的制约而较少使用,而后者作为测量多糖的经典方法,操作简单易行,结果准确可靠,在五味子多糖的研究中得到了广泛的应用。上海创赛提供五味子酚,69363-14-0,HPLC≥98%,C78-A0823-20mg,价格640元。

  目前测量五味子多糖的比色法主要有硫酸苯酚法、硫酸蒽酮法、3,5-二硝基水杨酸法( DNS) 等,均是以葡萄糖为对照品,计算出样品中多糖的质量分数。

  硫酸苯酚法和硫酸蒽酮法是通过硫酸水解多糖,脱水生成糠醛或其衍生物,与相应的显色剂显色后在特定波长处有最大吸收,硫酸苯酚法和硫酸蒽酮法显色原理大致相同,均是多糖在强酸性条件下水解成单糖,单糖再进一步脱水形成糖醛衍生物而显色。然而本实验结果显示,两种方法测定五味子中多糖的结果相差近10%,原因可能是组成该成分的不同单糖与硫酸苯酚或硫酸蒽酮试剂在反应条件方面有不同,从而导致结果的差异。有关五味子单糖的组成及两种显色方法的最佳反应条件尚有待进一步研究。上海创赛提供ELISA试剂盒96T/48T,大鼠核因子κB受体活化因子配基Elisa试剂盒,LH-E10218RA-96T,价格1700元。

  DNS 法是通过DNS 试剂与还原糖共热产生棕红色化合物,并在特定波长处有最大吸收,然后测定总糖供试液和单糖供试液中的单糖质量分数,计算时再将单糖供试液的单糖质量分数从总糖供试液的单糖质量分数中减去,最终算出多糖质量分数。用DNS 法测定单糖供试品溶液中单糖质量分数时,发现其吸收值极小,几乎可以忽略不计。这一结果表明五味子多糖提取液中单糖质量分数较低,原因可能是在水提取五味子多糖前用80%乙醇回流,去除木脂素,单糖等杂质,消除了它们对多糖质量分数测定的影响,因此用DNS 法的优势不明显。

  从各方面的数据分析比较后发现,采用苯酚法测定结果比较稳定,操作简单易行,因而可认为此法是测定五味子中多糖较为理想的方法。但因苯酚容易氧化,见光或遇氧即逐渐氧化成淡红色物质,因此在测定中应该避光,且操作要迅速。

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