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细胞培养实验——无菌操作环境

教育装备采购网 2016-08-05 10:01 围观754次

  组织培养(Tissue culture)是在体外模拟体内生理环境,在无菌、适当温度和一定营养条件下。使从体内取出的组织生存、生长繁殖和传代,并维持原有的结构和功能特性。广义的组织培养与体外培养同义。体外培养(Invitro)包括所有结构层次的培养,即:组织培养、细胞培养和器官培养。

  所谓细胞培养(Cell culture)是指细胞包括单个细胞在体外条件的生长。 组织培养的发展史已有近百年,最初的组织培养是胚胎学和微生物学的引申,建立于无菌原则上,用天然体液(如胎汁、血浆)来维持从整体切下的组织块,对细胞进行形态和功能的观察。

  组织细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作,避免微生物及其他有害因素的影响。目前,超净工作台的广泛使用,很大程度上方便了组织细胞培养工作,并使一些常规实验室有可能用于进行细胞培养。上海创赛提供:60x15mm细菌培养皿,带盖,三出口,商品编号:R01-66-1560-60x15mm​,价格374元。

  细胞培养实验室应能进行六方面的工作:无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、储藏。

  无菌操作区

  (1)无菌操作室:

  无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的区域,最好能与外界隔离,不能穿行或受其他干扰。

  理想的无菌操作室应划为三部分:

  a) 更衣室—―供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。

  b) 缓冲间—―位于更衣间与操作间之间,目的是为了保证操作间的无菌环境,同时可放置恒温培养箱及某些必需的小型仪器。

  c) 无菌操作间—―专用于无菌操作、细胞培养。其大小要适当,且其顶部不宜过高(不超过2.5m)以保证紫外线的有效灭菌效果;墙壁光滑无死角以便清洁和消毒。上海创赛提供:9.0CM一次性细胞培养皿,平底灭菌,适合细胞贴壁生长,商品编号:C81-TCD010090-10个/包,价格16.8元。

  工作台安置不应靠墙壁,台面要光滑压塑作表面,漆成白色或灰色以利于解剖组织及酚红显示pH的观察。

  无菌操作间的空气消毒:紫外线灯—-产生臭氧,并且室内温度及湿度均较高,不利于工作人员健康。

  空气过滤的恒温恒湿装置—-最好。

  洁净室(区)空气洁净度级别表洁净度级别:

  尘粒最大允许数/立方米 100级 3,500 0 5 110000级

  微生物最大允许数 350,000 2,000 100 3100000级

  浮游菌/立方米 3,500,000 20,000 500 10300000级

  沉降菌/皿 10,350,000 60,000 - 15

  无臭氧紫外线消毒器电子消毒灭菌器—-在高压电场作用下,电子管的内外电极发生强烈电子轰击,使空气电离而将空气中的氧转换成臭氧。臭氧是一种强氧化剂,能同细菌的胞膜及酶蛋白氢硫基进行氧化分解反应,从而靠臭氧气体弥漫性扩散达到杀菌之目的,消毒时没有死角。消毒后空间的残留臭氧只需30~40min即能自行还原成氧气,空气不留异味,消毒物体表面不留残毒。

  (2)净化工作台:

  操作简单,安装方便,占用空间小且净化效果很好。

  一般细菌培养室使用的净化工作台主要有两种:

  a)侧流式或称垂直式

  b)外流式或称水平层流式。

  净化工作台工作原理(大致相同)—-通常是将室内空气经粗过滤器初滤,由离心风机压入静压箱,再经高效空气过滤器精滤,由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区,从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。

  侧流式工作台—-空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧,也有从上向下或从下向上流向对侧,形成气流屏障保持工作区无菌。工作台结构为封闭式。外流式(水平式)工作台—-净化后的空气面向操作者流动,因而外方气流不致混入操作,但进行有害物质实验操作则对操作者不利。工作台结构为开放式(已少用)。

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