凝胶过滤是利用具有一定口径范围的多孔凝胶的分子筛作用对生物大分子进行分离的层析技术。当样品随流动相经过由凝胶组成的固定相时，分子量大的物质不能扩散进入凝胶颗粒内部，于是随流动相流经颗粒之间的狭窄空隙，首先洗脱出层析柱;分子量小的物质可以扩散进入凝胶颗粒内部，比较大分子量物质流经的载面积宽，流动速度慢，而后被洗脱出来。这样分子量大和分子量小的物质便得以分离(图3-7)。即固定相的网孔对不同分子量的样品成分具有不同的阻滞作用，使之以不同的速度通过凝胶柱，从而达到分离的目的，凝胶过滤又因此得名“分子筛层析”和“凝胶排阻层析”。
在实际工作中，对于同一个凝胶柱来说，各种分子量的物质有其固定的洗脱体积。因此，准确掌握凝胶柱的一些基本因素是十分有益的。上海创赛科技提供7320-34-5，焦磷酸钾，AR ，商品编号：D16-1005238-500g，价格52元。
凝胶柱的总体积(Vt)：凝胶颗粒之间空隙的体积(外水体积Vo)、凝胶颗粒网眼内的体积(内水体积Vi)和凝胶颗粒基质本身的体积(Vr)的总和(图3-8)。
Vt=Vo+Vi+Vr
如果被分离的物质分子量很大，完全不能进入网孔内，那末它从柱上洗脱下来(小样品时以洗脱峰为准)所需的洗脱液体积(Ve)就等于颗粒间隙的体积(Vo)，即Ve=Vo。如果被分离物质的分子量极小，可以非常自由的通过网孔即进出凝胶颗粒，那么它的洗脱液体积就应当等于颗粒内和颗粒间隙体积的总和(Ve=Vo+Vi)。至于分子量位于上两者之间的，其洗脱体积便位于Vo 和Vo+Vi 之间。可见，分子量大小不同的物质，其洗脱体积不同，从而可以用于物质的分离。另外，如果在有已知分子量的标准物质做对照的条件下，就可以根据洗脱体积来估计待测物质的分子量(图3-9)。
Sephadex G-200(超细颗粒)柱2.6×70cm，洗脱液：0.05mol/L 磷酸钾缓冲液，内含0.1 mol/LNaCl及0.02%NaN3，流速1ml/cm2/hr。
1、过氧化氢酶(210 000)
2、醛缩酶(158 000)
3、牛血清蛋白(67 000)
4、卵清蛋白(43 000)
5、糜蛋白酶原A(25 000)
6、核糖核酸酶A(13 700)
凝胶过滤除用于生物大分子的分离、分子量测定外，还可用于提纯、脱盐和复合物组分成分分析等。上海创赛科技提供9003-05-8，聚丙烯酰胺，Polyacrylamide，非离子型，分子量：200万-1400万，商品编号：C16-P10674-500g，价格68元。
适用于做凝胶过滤的材料有多种，主要有葡聚糖凝胶颗粒(Sephadex G)、琼脂糖凝胶颗粒(Sepharose)和聚丙烯酰胺凝胶颗粒(Bio Gel)等。现将这些凝胶颗粒的种类和某些应用数据列于表3-2。
不论何种凝胶，其共同特点是化学性质稳定，不带电，与待分离物质吸附力很弱，不影响待分离物质的生物活性，样品得率可达100%，凝胶过滤尚有操作简便，凝胶柱不经特殊处理便可反复使用等特点，是近年来被广泛应用的生化技术之一。上海创赛科技提供卵清蛋白，Albumin from chicken egg white，Grade II，9006-59-1，商品编号：B11000011-10g，价格22.4元。
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