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上海古朵:改良油红O染色液操作步骤

教育装备采购网 2017-07-11 09:10 围观461次

  脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称,其共同的物理特性是不溶于水,易溶于有机溶剂(如乙醇、等)。人体的脂肪主要有两种:1、储存脂肪,如中性脂肪,主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。2、结构脂肪,如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等),主要分布于细胞内。中性脂肪(Neutral fat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类,呈中性。中性脂肪是储存能量的方式之一,在氧化时释放出能量。中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹、油红O法等。传统方法采用苏丹染料,最近发现偶氮染料油红O更适合脂肪的染色。油红O是很强的脂溶剂和染脂剂,较易与甘油三脂结合呈小脂滴状,

  与磷脂结合力稍差。其染色原理一般认为是物理上的溶液作用或吸附作用,借溶液作用使脂肪染色。染料在冰冻切片内脂质的溶解度较原溶剂中的溶解度更大,所以在染色时染料就从有机溶剂转移入脂质而使脂肪染色。

  改良油红O染色液主要用于显示组织器官的脂肪变性和类脂质的异常沉着,常发生于肝、肾、心等实质脏器的脂肪变性,细胞内出现多数中性脂肪滴;鉴别和诊断脂肪组织中所发生的肿瘤及其性质。标本不采用含有乙醇的固定液(如需要固定可采用10%福尔马林),样本不采用石蜡切片,需用冰冻切片或碳蜡切片,脂肪的阳性染色结果呈橘黄至红色,但具体颜色因脂质浓度而定。

  产品组成

  产品

  规格

  2×50ml

  2×100ml

  储存

  试剂(A):改良

  Oil Red O Stain

  A1: Oil Red O Stain A

  30ml

  60ml

  4℃,避光

  A2: Oil Red O Stain B

  20ml

  40ml

  4℃

  充分摇匀A1、A2后,按A1、A2=3:2比例混合静置10min, 即为改良Oil Red O Stain,不宜提前配制;如有条件尽量进行过滤,以免色素沉淀,造成假阳性。

  试剂(B): Mayer 苏木素染色液

  50ml

  100ml

  4℃,避光

  使用说明书

  1份

  自备材料:

  1、60%异丙醇

  2、蒸馏水

  3、1%盐酸溶液

  甘油明胶或阿拉伯糖胶

  操作步骤(仅供参考)

  1、冰冻切片厚度6~10μm,不固定或10%福尔马林固定10min后水洗。

  2、入蒸馏水中稍冲洗。

  3、 入60%异丙醇浸洗20~30s。

  4、 入改良油红O染色液(加盖),密闭染色10~15min。

  5、 分色: 入60%异丙醇稍洗以便去除染液。

  6、 入蒸馏水稍微清洗。

  7、 入 Mayer 苏木素染色液,复染核1~2min。

  8、 (可选)1%盐酸溶液稍微分化一下。

  9、 (可选)自来水漂洗10min或稀碳酸锂溶液促蓝。

  10、 入蒸馏水稍微清洗

  11、 用滤纸吸干周围水分。甘油明胶或阿拉伯糖胶封固。

  染色结果:

  中性脂肪

  橙红色或者橘红色

  细胞核

  蓝色

  注意事项

  1、改良油红O染色液不够稳定,易产生沉淀,不宜提前配制。

  2、如果60%的异丙醇不易获得,亦可采用70%的乙醇。

  3、由于脂肪易溶于有机溶剂,所以显示脂肪一般不能像石蜡切片一样处理,而通过冰冻切片染色来显示。

  4、作脂肪染色的冰冻切片不可太薄,过薄的切片常会使脂质丢失。

  5、Mayer苏木素染色液复染时间不能过长。

  6、染色结果不能长期保存,应尽快观察及照相。

  7、甘油明胶封固的样本,保存时间不长。如需长期保存,可以在盖玻片与载玻片交界的边缘用中性树胶封闭。

  有效期:12个月有效。

来源:教育装备采购网 作者:上海古朵 责任编辑:李瑶瑶 我要投稿
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