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土壤脲酶(Solid-Urease,S-UE)测定

中国教育装备采购网 2020/5/11 10:40:19 围观463次 我要分享

  正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

  测定意义:

  S-UE能够水解尿素,产生氨和碳酸。土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关。土壤脲酶活性反应了土壤的氮素状况。

  测定原理:

  利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N。

  需自备的仪器和用品:

  可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。

  试剂的组成和配制:

  试剂一:甲苯2mL×1 瓶,4℃保存;(自备)

  试剂二:粉剂×1 瓶,临用前加入9mL蒸馏水,充分溶解待用,4℃保存;用不完的试剂4℃保存;

  试剂三:液体19mL×1 瓶,4℃保存;

  试剂四A 液:液体×1 支,4℃保存;

  试剂四B 液:液体×1 瓶,4℃保存;临用前将A 液倒入B 液中混合,待用;用不完的试剂4℃保存一周;

  试剂五:液体2mL×1 瓶,4℃保存;

  测定步骤:

  1、培养

测定管

对照管


风干土样(g)

0.05

0.05

试剂一(μL)

20

20

振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置15min

试剂二(μL)

90


蒸馏水(μL)

90


试剂三(μL)

190

190

  混匀,放入37℃水浴培养24h 后,10000g 25℃离心10min,取上清液。

  2、将培养结束的上清液稀释10倍(取0.1mL上清液,加入0.9mL蒸馏水)。

  3、测氨量(在微量石英比色皿或96孔板中加入下列试剂)

测定管

对照管


稀释后的上清液(μL)

80

80

试剂四(μL)

15

15

试剂五(μL)

15

15

充分混匀,室温放置20min

蒸馏水(μL)

90

90

  混匀,于578nm处,蒸馏水调零,读吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

  脲酶活力计算

  a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

  标准条件下测定的回归方程为y=0.0915x +0.0373;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值A。

  单位的定义:每天每g土样中产生1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。

  脲酶活力(μg/d/g 土样)=(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反总÷W÷T

  =656×(ΔA -0.0373)

  10:稀释倍数;T:反应时间,1d;V 反总:反应体系总体积:0.3mL;W:样本质量,0.05g。

  b.用96孔板测定的计算公式如下

  标准条件下测定的回归方程为y=0.04575x+0.0373;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值A。

  单位的定义:每天每g土样中产生1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。

  脲酶活力(μg/d /g 土样)=(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反总÷W÷T

  =1312×(ΔA -0.0373)

  10:稀释倍数;T:反应时间,1d;V 反总:反应体系总体积:0.3mL;W:样本质量,0.05g。

土壤脲酶(Solid-Urease,S-UE)测定

点击进入优选生物展台查看更多 来源:中国教育装备采购网 作者:上海酶科生物科技有限公司 责任编辑:王道 我要投稿
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