随着新冠核酸检测的日常化,qPCR这一分子诊断领域的前沿技术也走进了大众视野,这一技术相比原本的传统PCR有着诸多技术优势使其在疫情中脱颖而出成为全球范围内核酸检测的金标准。它到底有什么优势使得它可以普遍推广且保持优异的可靠性?
qPCR的优势
1.风险低:全程只开盖两次,实验室污染风险小
2.相比mNGS繁琐的操作步骤,操作较为简单,更加容易推广
3. 速度快:扩增的DNA在qPCR反应进行的同时就被检测出来,所以不需要像传统PCR那样在之后单独检测(如在琼脂糖凝胶上)。
4. 效率高:qPCR被认为是一种高xiao率的方法,与液体处理自动化站配合,它可在短时间内处理大量的样品。
5. 灵敏度高:qPCR能够分辨出目标DNA分子数量的2倍差异,它可以检测到低至只有几个分子的初始DNA。与PCR相比,只要1/1000的量就可以了。
6. 量化范围广:可以在几个数量级上进行广泛的量化
7. 重现性:通常被认为是具有高度重现性的。
qPCR的应用
很多小伙伴可能只是通过核酸检测,对qPCR产生了基础的认识,但它的应用实际上可并不局限于用于核酸检测。由于技术优势明显,qPCR的应用范围很广。由于qPCR已经存在了足够长的时间,各项研究早已证明了它的可靠性和稳健性。同样,qPCR循环器的制造商已开发了配套的平台,液体处理自动化设备的供应商也开发了兼容qPCR的自动化解决方案。
常见的是qPCR在分子诊断中的应用,它正在慢慢取代传统方法(显微镜图像)。它被用来检测、识别和量化导致疾病的微生物(细菌、病毒和真菌)。有了qPCR,人工劳动减少了。它可以实现在短时间内处理大量的样品(每次运行多达384或者甚至1536个反应),是诊断实验室中不可替代的方法。但必须指出的是,该方法只检测微生物的DNA或RNA的存在,而不能检测其生存能力。因此,有时仍然需要传统的微生物学技术与之配合。此外qPCR另外一个非常重要的应用领域是基因表达研究,它可以帮助我们了解生物学、微生物学、医学和其他生命科学的各个领域。