一、目的
用于化妆品微生物指标（菌落总数、霉菌和酵母总数、耐热大肠菌群、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌）检测；
二、参照标准及微生物限量
本方案参照食品药品监督管理总局批准颁布的《化妆品安全技术规范》2015版和2022版征求意见稿、SN/T 2098-2008 《食品和化妆品中的菌落计数检测方法-螺旋平板法》。
三、组成部分
本方案提供化妆品微生物指标检测所需仪器和培养基及其他试剂。
四、检测流程及方案
流程解读
1.样品采集
2.样品前处理
2.1液体样品：用吸管手动吸取或用自动重量稀释仪自动称重稀释，均质器自动均质后制成1:10检样。按需进行梯度稀释。
2.2 油性液体样品：10g样品+5mL灭菌石蜡油混匀+10ML灭菌吐温80
（40℃-44℃水浴振荡10min）+75ML灭菌生理盐水（40℃-44℃预温），乳化后制成1:10的悬液。按需进行梯度稀释。
2.3 膏、霜、乳剂半固体状样品
2.3.1 亲水性样品：10g样品+ 90ML灭菌生理盐水，均质1min—2min，静止取上清，上清为1:10匀液。按需进行梯度稀释。
2.3.2 疏水性样品：10g样品+10mL 灭菌液体石蜡+10mL 灭菌吐温 80+70mL 灭菌生理盐水，均质3min—5min，制成1：10 检液。按需进行梯度稀释。
2.3.3 固体样品：称取10g+90mL 灭菌生理盐水，均质3min—5min，充分均质混匀，静置后，取上清液作为1：10 的检液。
总结：化妆品根据与水分子的亲和性及性状的不同，具有不同的类型，包括疏水性样品和亲水性样品以及液体样本和固体样本，相关标准规定不同类型的样品取10g/10mL经过不同的前处理，形成1:10的检液。其中，亲水性样本一般选择生理盐水进行稀释，而油性液体样本或疏水性样本稀释液除生理盐水以外，还需添加一定体积的非离子型表面活性剂（如tuwen80）与液体石蜡混合用于样品的乳化过程，从而使微生物更均匀的分散，以便于其检出。此过程一般可通过重量稀释仪和均质器实现。
3. 样品接种
根据化妆品技术规范需要倾注法接种样品，但此法对操作人员的要求较高，而涂布法操作难度低，可预先倒置相关微生物检测的培养基平板，用自动细菌涂布仪涂布接种，上样量可调至100微升。此外，根据SN/T 2098-2008 《食品和化妆品中的菌落计数检测方法-螺旋平板法》，化妆品中菌落计数还可选择螺旋接种法。
4.样品培养
细菌用恒温培养箱培养，霉菌和酵母菌用霉菌培养箱，培养条件根据微生物种类的不同而不同。
表2 不同微生物指标检测培养条件
微生物种类 检测指标 | 培养条件 | |
温度 | 时间 | |
菌落总数 | 36℃±1℃ | 48h±2h |
耐热大肠菌群 | 44.5℃±0.5℃/36℃±1℃ | 24h±2h/18h-24h |
铜绿假单胞菌 | 36℃±1℃ | 18h—24h |
金黄色葡萄球菌 | 36℃±1℃ | 24h±2h |
霉菌和酵母菌 | 28℃±2℃ | 5d |
5.样品检测
微生物定量检测用全自动菌落计数仪实现菌落计数，如样品中菌落总数的测定、霉菌及酵母菌总数；微生物定性检测用自动微生物生化鉴定系统实现，如铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌的定性。
五．产品信息
表3 化妆品微生物指标检测相关设备列表
序号 | 设备名称 | 推荐型号 | 推荐品牌 |
1 | 重量稀释仪 | DW-JURAY | 杭州大微 |
2 | 拍击式均质器 | DW-4 | 杭州大微 |
3 | 微生物试剂自动分装仪 | DW-9 | 杭州大微 |
4 | 全自动微生物螺旋接种仪 | DW-L2000 | 杭州大微 |
5 | 自动微生物涂布接种仪 | DW-16 | 杭州大微 |
6 | 全自动革兰氏染色仪 | DW-GS100 | 杭州大微 |
7 | 细菌麦氏浊度仪 | DW-MF30 | 杭州大微 |
8 | 自动微生物生化鉴定系统 | DW-M80 | 杭州大微 |
9 | 全自动微生物菌落计数仪 | DW-V9 | 杭州大微 |
10 | 恒温培养箱 | BPMJ-150F | 上海力康 |
11 | 霉菌培养箱 | BPH-9162 | 上海力康 |
12 | 水浴振荡器 | HTS-10 | 上海赫田 |
表4 化妆品微生物指标检测相关培养基
序号 | 检测指标 | 培养基名称 | 规格及货号 | 推荐品牌 |
1 | 细菌总数 | TTC卵磷脂、吐温 80 —营养琼脂 | 250g/瓶, HB5189 | 青岛海博 |
2 | 耐热大肠菌群 | 双倍乳糖胆盐（含中和剂） | 250g/瓶， HB8593 | 青岛海博 |
3 | 伊红美兰（EMB）琼脂 | 250g/瓶， HB0107 | 青岛海博 | |
4 | 胰蛋白胨水 | 250g/瓶， HB5218 | 青岛海博 | |
5 | 铜绿假单胞菌 | SCDLP 液体培养基 | 250g/瓶 | 广东环凯 |
6 | 十六烷基三甲基溴化铵培养基 | 9cm*10/包， HBPM5184 | 青岛海博 | |
7 | 营养琼脂 | 250g/瓶， HB0109 | 青岛海博 | |
8 | 金黄色葡萄球菌 | SCDLP 液体培养基（见上）或 7.5%氯化钠肉汤 | 250g/瓶， HB4119 | 青岛海博 |
9 | Baird Parker 平板 | 250g/瓶， HB4115 | 青岛海博 | |
10 | 亚碲酸盐卵黄增菌液（Baird Parker 平板添加剂） | 5ml*10 ，HB4116-1 | 青岛海博 | |
11 | 霉菌及酵母 | 孟加拉红琼脂培养基 | 250g/瓶，HB0237-2 | 青岛海博 |
表5 化妆品微生物指标检测相关试剂
序号 | 试剂名称 | 用途 | 规格及货号 | 推荐品牌 |
1 | 氯化钠 | 样品前处理稀释 | 500g/瓶 | 国药 |
2 | 吐温80 | 样品乳化剂 | 100ml/瓶，9005-65-6 | biosharp |
3 | 无菌液体石蜡 | 样品前处理 | 1.7ml*20， GS070 | 青岛海博 |
4 | Kovacs氏靛基质试剂盒 | 耐热大肠靛基质实验 | 5ml*2/盒；HB8279 | 青岛海博 |
5 | 革兰氏染色液 | 细菌染色 | 500Ml/瓶，3瓶/套 | 杭州大微 |
